第一章 色谱分析概论.ppt

色谱法 Chromatography 色谱分析法？ (希腊文chroma-色； graphos-谱） 1.1 色谱法发展简史 茨维特的实验 茨维特（M.S. Tswett)： 俄国植物学家，主要从事植物色素的研究工作 1903年3月21日：华沙自然科学会议生物学会议上宣读论文：“On a new category of absorption phenomena and their application to biochemical analysis” “一种新型吸附现象及其在生化分析上的应用”。 在1906 年发表的文章中，首次提出了色谱的概念。 茨维特的实验-分离植物色素 在色谱法中，将填入玻璃管或不锈钢管内静止不动的一相（固体或液体）称为固定相 ； 自上而下运动的一相（一般是气体或液体）称为流动相 ； 装有固定相的管子（玻璃管或不锈钢管）称为色谱柱 。 色谱法是一种分离方法。 它的特点是：有两相，一是固定相，一是流动相，两相作相向运动。 将色谱法用于分析中，则称为色谱分析。 色谱分析是一种分离、分析法。 1941年：英国人马丁与辛格首次突出液-液色谱法（经典液相色谱发）； 1952年：英国人马丁与辛格建立气液色谱法（脂肪酸混合物的分离），发展了气相色谱； 1956 Van Deemter提出速率理论； 1957年美国Golay首先应用小口径毛细管进行色谱分离； 1959年Porath和Flodin空间排阻色谱法（固定相：多孔凝胶) 1967 Kirkland等研制高效液相色谱仪； 1970以后逐渐发展了高效液相色谱； 1975年H.Small 研究组建立了离子色谱法； 1979年气相色谱应用的飞跃：弹性石英毛细管色谱柱的商品化； 20世纪50年代：毛细管电泳技术的建立和发展。其迅速发展在20世纪80年代毛细管区带电泳的建立，之后发展了胶束电动色谱、毛细管凝胶色谱、毛细管电色谱（主要应用于：蛋白质分离、糖分析、DNA测试、手性分离、单细胞分析） 我国色谱研究工作起步于1954年，有中科院大连化物所进行早期的理论和技术研究（卢佩章、张玉奎） 色谱分析法的重要贡献 诺贝尔化学奖：1948年，瑞典Tiselins，电泳和吸附分析；1952年，英国马丁(Martin)和辛格(Synge)，分配色谱。 应用的科学领域：化学、化工、轻工、石油、环保、医药、农业等几乎所有学科领域。为信息科学、生命科学、材料科学、环境科学等新兴学科的发展作出了重要贡献。 1.3 色谱法的特点与局限性 1.特点 1）选择性好 2）效率高、速度快 3）灵敏度高、样品用量少 4）应用范围广 2. 局限性 1）定性能力相对弱； 2）定量时必须有标准品； 3）有些物质如异构体、固体物质的分析能力较差。 1.4 色谱图和相关术语 色谱过程 　　实现色谱操作的基本条件是必须具备相对运动的两相，固定相(stationary phase)和流动相(mobile phase)。 　　色谱过程是组分的分子在流动相和固定相间多次“分配”的过程。 1.色谱图（色谱流出曲线）是由检测器输出的电信号强度对时间作图所绘制的曲线，又称为色谱流出曲线。 2.基线 在实验操作条件下，色谱柱后没有样品组分流出时的流出曲线称为基线，稳定的基线应该是一条水平直线。 3.峰高 色谱峰顶点与基线之间的垂直距离，以（h）表示。 色谱流出曲线和色谱峰 基线（a） 峰高（h） （四）保留值 1.死时间tM 不被固定相吸附或溶解的物质进入色谱柱时，从进样到出现峰极大值所需的时间称为死时间，它正比于色谱柱的空隙体积，如下图。 2. 保留时间tR 试样从进样到柱后出现峰极大点时所经过的时间，称为保留时间，如下图。 3.调整保留时间tR′ 某组分的保留时间扣除死时间后，称为该组分的调整保留时间， 即 tR′= tR ? tM 由于组分在色谱柱中的保留时间tR包含了组分随流动相通过柱子所需的时间和组分在固定相中滞留所须的时间，所以tR实际上是组分在固定相中保留的总时间。 4.死体积V0 指色谱柱在填充后，柱管内固定相颗粒间所剩留的空间、色谱仪中管路和连接头间的空间以及检测