10种中药对产ESBLs大肠埃希菌体外抑菌活性.docVIP

10种中药对产ESBLs大肠埃希菌体外抑菌活性 　　[摘要] 目的 测定乌梅等10味中药对产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌的体外抑菌活性，明确其最低抑菌浓度（MIC），为临床应用中药治疗产ESBLs大肠埃希菌感染提供参考依据。 方法 各收集10株产ESBLs和非产ESBLs大肠埃希菌，制备适当浓度的各种中药煎液备用。采用琼脂稀释法进行定量抑菌试验，分别测定和比较各种中药的MIC值。对抑菌作用明显的中药进行产ESBLs和非产ESBLs大肠埃希菌MIC比较。 结果 中药乌梅、五倍子、黄连、黄芩、黄柏、穿心莲、鱼腥草、重楼、金银花、连翘对产ESBLs大肠埃希菌的MIC值分别为（17.19±4.94）mg/mL、（18.75±6.59）mg/mL、（37.50±10.21）mg/mL、（46.20±15.10）mg/mL、（450±105.41）mg/mL、（475±79.06）mg/mL、（237.50±39.53）mg/mL、（118.75±59.29）mg/mL、（425±88.19）mg/mL、（225±52.70）mg/mL，其中乌梅、五倍子、黄连、黄芩的MIC均值分别为17.19 mg/mL、18.75 mg/mL、37.50 mg/mL、46.20 mg/mL，有较好的抑菌效果。乌梅、五倍子、黄连、黄芩对产ESBLs和非产ESBLs大肠埃希菌MIC值经统计学处理，P 0.05。 结论 10味中药对产ESBLs大肠埃希菌株均有不同程度的体外抑菌活性。其中乌梅和五倍子效果最强，其次是黄连、黄芩，其余的中药抑菌活性较弱。 [关键词] 中药；大肠埃希菌；超广谱β-内酰胺酶；药物敏感试验 [中图分类号] R285.5 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2013）31-0065-03 众所周知，大肠埃希菌是医院内感染常见的病原菌，随着抗生素的广泛使用，细菌的耐药性问题也趋于严重[1]。有报道称产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌已占临床分离到的大肠埃希菌60.1%[2]。因此，探寻新的不同于抗生素的抗菌药物对于改善产ESBLs大肠埃希菌感染性疾病的治疗现状具有重要意义。近年来许多研究表明中药具有抑菌的生物活性[3-6]。本文旨在研究乌梅等10味中药对产ESBLs大肠埃希菌的体外抑菌活性，为临床应用中药治疗耐药菌感染提供参考依据。 1 材料与方法 1.1 实验菌株 产ESBLs和非产ESBLs大肠埃希菌均来源于新余市中医院门诊和住院患者的临床标本。分离培养按照《全国临床检验操作规程》第3版[7]进行，鉴定和药敏使用合肥恒星细菌鉴定和药敏分析仪。ESBLs的确证实验采用临床和实验室标准化研究所（CLSI）推荐的双纸片相邻试验（协同法）[8]。各收集至少10株经过确认的产ESBLs大肠埃希菌和非产ESBLs大肠埃希菌保存-20℃冰箱中备用。 1.2 标准菌株 大肠埃希菌ATCC25922，由温州康泰公司提供。 1.3 中药煎液的制备 十种中药乌梅、黄连、黄芩、黄柏、五倍子、穿心莲、重楼、金银花、鱼腥草、连翘均取自新余市中医院中药房。以乌梅为例。将100 g乌梅置于烧瓶中，加入5～8倍体积的蒸馏水，浸泡30 min，加热待其沸腾后调节火力大小使其微沸30 min，过滤将滤液倒入烧杯中。然后往烧杯中加入约3～5倍体积蒸馏水，加热煮沸，微沸30 min，过滤。合并两次滤液，并进行减压蒸馏，使药液体积达100 mL，即得到中药的水提浓缩液，浓度为1 000 mg/mL。灭菌后储存在-20℃冰箱中备用。 1.4 菌悬液的制备 挑取经过活化和纯培养18～24 h的菌落，用生理盐水调成0.5麦氏比浊单位（含菌量1.5×108 CFU/mL），再1∶10稀释，使其含菌量为1.5×107 CFU/mL，备用。 1.5 MIC测定 采用CLSI推荐的琼脂稀释法。 1.5.1 含药平板制备 取三角烧瓶10只，分别加入融化的MH琼脂25 mL，在第一只加入100%（1∶1）的中药煎液25 mL，使其浓度为500 mg/mL，混匀后取出25 mL，加入第二只烧瓶中，再混匀后取出25 mL加入第三只烧瓶中，依此类推，直到最终浓度为0.98 mg/mL，高压灭菌后倾倒平板待用。 1.5.2 琼脂稀释法 用上述配好的含药MH琼脂平板（含药量分别为500、250、125、62.50、31.25、15.63、7.81、3.91、1.95 mg/mL）进行实验。用微量移液器吸取1 μL含菌量为1.5×107 CFU/mL的菌悬液接种平板，最终接种菌量约每个接种点为104个菌。待菌液干后将平板倒置放35℃温箱培养18～24 h后观察结果，以肉