生化1-蛋白质.ppt

生 物 化 学 授课教师：卢韫 淮南师院化生系 3. 蛋白质的三级结构 ——指多肽链上的所有原子（包括主链和侧链）在三维空间的分布。 肌红蛋白 4. 蛋白质的四级结构 ——多肽亚基（subunit）的空间排布和相互作用。亚基间以非共价键连接。 血红蛋白 共价键 次级键 化学键 肽键 一级结构 氢键 二硫键 二、三、四级结构 疏水键 盐键 范德华力 三、四级结构 （三）蛋白质分子中的共价键与次级键 肌红蛋白是1957年由John Kendrew 用X射线晶体分析法测定的有三维结构的第一个蛋白质。它是典型的球形蛋白质，高度折叠成紧密结构，疏水氨基酸残基大部分埋藏在分子内部，极性残基在表面。肌红蛋白中有8条α-螺旋。由多肽的折叠形成的疏水空隙内是血红素辅基，通过肽链上的His残基与肌红蛋白分子内部相连，它对肌红蛋白的生物活性是必需的（与O2结合）。 六、蛋白质分子结构与功能的关系 蛋白质分子具有多样的生物学功能，需要一定的化学结构，还需要一定的空间构象。 （一）蛋白质一级结构与功能的关系 1. 种属差异 蛋白质一级结构的种属差异十分明显，但相同部分氨基酸对蛋白质的功能起决定作用。根据蛋白质结构上的差异，可以断定它们在亲缘关系上的远近。 2.分子病 ——蛋白质分子一级结构的氨基酸排列顺序与正常有所不同的遗传病。 镰状细胞贫血（sick-cell anemia） 从患者红细胞中鉴定出特异的镰刀型或月牙型细胞。 β-链 1 2 3 4 5 6 7 Hb-A Val-His-Leu-Thr-Pro-Glu-Lys… Hb-S Val-His-Leu-Thr-Pro-Val-Lys… Val 取代Glu 含氧-HbA O2 O2 粘性疏水斑点 含氧HbS 脱氧HbS 疏水位点 血红蛋白分子凝集 （二）蛋白质构象与功能的关系 别（变）构作用：含亚基的蛋白质由于一个亚基的构象改变而引起其余亚基和整个分子构象、性质和功能发生改变的作用。因别构而产生的效应称别构效应。 血红蛋白是别构蛋白，O2结合到一个亚基上以后，影响与其它亚基的相互作用。 肌红蛋白 血红蛋白 在肺部O2的压力 在毛细血管中O2的压力 饱和度 0 0.5 1 20 40 60 80 100 120 O2压力 2 4 6 8 10 12 14 0.5 1.0 1.5 2.0 OH-加入的当量 pH pK1 pI pK2 （3） （2） （1） Gly的滴定曲线 OH- OH- +H3N—C—COOH H H （1） +H3N—C—COO- H H （2） H2N—C—COO- H H （3） Gly解离作用 七、蛋白质的性质 （一）蛋白质的相对分子量 蛋白质相对分子量在10 000~1 000 000之间。测定分子量的主要方法有渗透压法、超离心法、凝胶过滤法、聚丙烯酰胺凝胶电泳等。 最准确可靠的方法是超离心法（Svedberg于1940年设计）：蛋白质颗粒在25~50*104 g离心力作用下从溶液中沉降下来。 沉降系数（s）：单位（cm）离心场里的沉降速度。 s = ———— v ω2x v =沉降速度（dx/dt） ω=离心机转子角速度（弧度/s） x =蛋白质界面中点与转子中心的距离（cm） 沉降系数的单位常用S，1S=1×10-13（s） 蛋白质分子量（M）与沉降系数（s）的关系 M = —————— RTs D（1－Vρ） R——气体常数（8.314×107ergs·mol -1 ·度-1） T——绝对温度 D——扩散常数（蛋白质分子量很大，离心机转速很快，则忽略不计） V——蛋白质的微分比容（m3·g-1） ρ——溶剂密度（20℃，g·ml-1） s——沉降系数 （二）蛋白质的两性电离及等电点 蛋白质在其等电点偏酸溶液中带正电荷，在偏碱溶液中带负电荷，在等电点pH时为两性离子。 电泳：带电颗粒在电场中移动的现象。分子大小不同的蛋白质所带净电荷密度不同，迁移率即异，在电泳时可以分开。 1. 自由界面电泳：蛋白质溶于缓冲液中进行电泳。 2. 区带电泳：将蛋白质溶液点在浸了缓冲液的支持物上进行电泳，不同组分形成带状区域。 （1）纸上电泳：用滤纸作支持物。 （2）凝胶电泳：用凝胶（淀粉、琼脂糖、聚丙烯酰胺）作支持物。 1）圆盘电泳：玻璃管中进行的凝胶电泳。 + — 2）平板电泳：铺有凝胶的玻板上进行的电泳。 - + 等电聚焦电泳：当蛋白质在其等电点时，净电荷为零，在电场中不再移动。 + + － － － － + － － － － － 5.0 6.0 7.0 稳定pH梯度 5.0 6.0