番茄红素产业化技术研究.ppt

番茄红素产业化技术研究概述 技术中心发酵实验室 侯保兵 目录 Transitional Page 国内硕士论文收录情况 国内博士学位论文（1989-2009） 中国若干番茄红素生产企业 番茄红素企业在中国的大致分布  番茄红素的作用机制 ●抗氧化性， 即所谓的“ 氧化压力” ●非抗氧化性 ①包括对细胞间隙的连接 ② 对基因功能的调控 ③ 对荷尔蒙免疫作用的调节 ④对致癌剂的代谢 ⑤ 对生化代谢途径的调控等 番茄红素的应用领域 3. 番茄红素的生产方法 提高植物有机体中番茄红素的方法（溶媒萃取法 超临界CO2萃取法） ● 基因工程手段 遗传育种，基因敲除、RNA干扰技术、代谢途径中酶的增强或抑制、 胡萝卜素的合成途径。 ● 植物有机体生理等影响因素 光照、温度、金属离子、氧化剂、还原剂、pH值、介质、某些化学物质； ● 萃取方法的改善及操作成本的降低 植物番茄红素生物合成相关基因的表达调控研究 ●Mn2+影响PSY八氢番茄红素合成酶的活性； ● Mn2+是决定GGPP用来合成类胡萝卜素关键性调控因子，对植物类胡萝卜素的合成至关重要； ● 2,6-二苯基吡啶和达草灭抑制PDS八氢番茄红素合成酶等抑制有色类胡萝卜素的合成； ●三乙基胺类物质 2- ( 4-硫代氯苯)-三乙基胺盐酸盐(CPTA) 等可抑制番茄红素beta-环化酶(LYC)的活性； ●乙烯与番茄红素合成相互依赖。12℃下气调贮藏的番茄果实无乙烯生成，也检测不到番茄红素；而当果实移入室温并置于正常大气中，随后乙烯即生成，番茄红素也开始合成。 提高微生物中番茄红素的方法（三孢菌除外发酵法） ●传统菌种诱变选育技术 ● 基因工程手段 基因敲除 RNA干扰技术 代谢途径中酶的增强或抑制（含代谢流控制方法） 转基因技术 三孢布拉霉菌产番茄红素技术研究 多核菌株的选育及遗传稳定性 ① 显性突变 容易被多核体等位基因覆盖; ② 隐性突变 三孢布拉霉菌在整个生长周期内均为多核体，高产bete-胡萝卜素（或番茄红素）的高产菌株是由两个CarS和CarD突变基因中任一突变而产生的，而CarS和CarD两者均属隐性突变，多核体的存在对隐性突变的分离造成了相当的障碍。 ③ CarS隐性突变体的分离解决方法 研究采用100μg/mL大剂量亚硝基胍诱变1×106个/mL孢子悬液，处理时间为30min, 存活率降到1%以下，但存活下来的孢子是功能上的单核体。 三孢布拉霉菌菌种的退化 三孢布拉霉菌的老化性状 ①三孢布拉霉菌的老化伴随着胡萝卜素的消失; ②胡萝卜素的消失发生在老化的早期可能是菌株老化的标志; ③老化性状在三孢布拉霉的老化菌株和正常菌株之间的传递是明显和迅速的; ④而老化性状在正常菌株的孢囊孢子之向的传递，菌丝之间, 菌丝与孢子之间; ⑤老化菌丝体内存在着可转移的老化因子的可能性; 参考：张建法, 黄为一, 吴江. 三孢布拉霉菌的老化性状传递特征初报. 菌物系统. 16(1):57~60,1997 老化因子可能的作用机制 ①老化因子可能在核酸水平上影响胡萝卜素合成酶，从而使菌体由于胡萝卜素的消失而表现为衰老; ②老化因子的作用可能直接影响整个代谢过程; ③其他因素也可能导致菌株的胡萝素含量的变化，从而使得菌株抗衰老能力发生改变 真菌中胡萝卜素的存在是较普遍的，胡萝卜素的合成、存在和调节与衰老是否直接有关值得探讨; 参考：张建法, 黄为一, 吴江. 三孢布拉霉菌的老化性状传递特征初报. 菌物系统. 16(1):57~60,1997 三孢布拉霉菌高产菌株优化选育技术特点小结 难处： ① 菌种有“+”、“-”之分，且生长过程中均为多核体； ② 单孢子的获得难度； ③ 菌种容易老化且老化性状容易快速传递； ④ 优良性状在传代过程中容易丢失； ⑤ 为刺激代谢产物，不能用常规（初级代谢产物或抗生素）方法驯化； 易处： ① 正菌老化速度较慢； ② 高产菌株外观性状明显，可增大初筛的筛选通量； 发酵工艺的优化 2. 种子质量＆接种方式 (1) 最优氧载体为： 正己烷，正十二烷 (2) 在使用氧载体的同时，添加表面活性剂可以大量提高番茄红素的产量，其中添加Tween80结果最佳。表面活性剂添加量为 0. 1%