产5α羟化紫杉二烯醇人工酵母的组合设计构建-化工学报.pdfVIP

第 67 卷 第 1 期 化 工 学 报 Vol.67 No.1 2016 年 1 月 CIESC Journal January 2016 产5α羟化紫杉二烯醇人工酵母的组合设计构建 翟芳，宋田青，肖文海，丁明珠，乔建军，元英进 （系统生物工程教育部重点实验室，天津大学化工学院制药工程系，天津化学化工协同创新中心，天津 300072 ） 摘要：利用工程化微生物生产天然药物如紫杉醇在近年来受到研究者广泛关注。本工作研究如何设计和构建人工 酵母以生产紫杉醇生物合成途径中第一个由细胞色素 P450 酶催化的羟化产物——5α 羟化紫杉二烯醇 （taxadien-5α-ol ）。利用组合设计原理，选用 3 种不同红豆杉来源的紫杉二烯 5α羟化酶和 2 种不同植物源的细胞 色素 P450 还原酶，分别对其进行 N 端穿膜区域的预测和截短，并对还原酶使用 2 种不同强度启动子进行调控， 所得羟化酶模块和还原酶模块之间分别表达共产生 72 种组合方式。然后将其分别整合入紫杉二烯生产菌株基因组 中，最终在72 个组合中筛选到 48 个可以生产 5α羟化紫杉二烯醇的菌株，最高产量 67.3 μg ·L−1，在酿酒酵母中 实现紫杉二烯 C5 位羟化产物的从头合成。研究结果表明，利用组合设计策略研究模块间相互作用及其与底盘间适 配性将为在微生物细胞中实现细胞色素 P450 酶系介导的催化反应过程提供重要参考。 关键词：合成生物学；5α羟化紫杉二烯醇；组合设计；酿酒酵母；生物催化；发酵 DOI ：10.11949/j.issn.0438-1157 中图分类号：Q 819 文献标志码：A 文章编号：0438—1157 （2016 ）01—0315—09 Combinatorial design and construction of artificial yeast for production of taxadien-5α-ol ZHAI Fang, SONG Tianqing, XIAO Wenhai, DING Mingzhu, QIAO Jianjun, YUAN Yingjin (Key Laboratory of Systems Bioengineering, Ministry of Education; Department of Pharmaceutical Engineering, School of Chemical Engineering and Technology, Tianjin University; Collaborative Innovation Center of Chemical Science and Engineering (Tianjin), Tianjin 300072, China) Abstract: Producing natural drugs such as Taxol by engineered microbes have attracted extensive attention in recent years. This work focused on how to design and construct artificial yeast for the production of taxadien-5α-ol, which was the first hydroxylated product catalyzed by