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攀西地区蚕豆根瘤菌抗逆性探究 　　摘要：对采自四川省攀西地区8个县市14个采样点的22株蚕豆根瘤菌进行耐盐、耐酸碱、抗生素抗性和耐高温或低温等抗逆性测定，结果表明，供试菌株普遍耐盐性差，仅有4株菌株能在10 g/L NaCl上生长，其中2株菌株能在50 g/L NaCl上生长；供试菌株对酸碱的耐性比较强，所有菌株都能在pH 5.0～10.0范围内生长，68.2%的菌株能在pH 4.0～12.0范围内生长；对温度的适应范围较宽，63.6%的菌株既能耐受8 ℃低温，又能耐受60 ℃高温热激30 min；对抗生素的抗性表现为氨苄青霉素氯霉素红霉素四环素庆大霉素卡那霉素。筛选出2株耐盐、耐酸碱、生长温度范围广和耐抗生素较强的菌株，分别为B1和B3。 关键词：蚕豆根瘤菌；抗逆性；攀西地区 中图分类号：S154.3 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）11-2516-03 攀西地区位于长江上游，处川西南地区、横断山脉系，属青藏高原、云贵高原向四川盆地的过渡带，地势西北高、东南低，相对高度5 653 m[1]。该地区光资源丰富，具有典型的南亚热带河谷气候特征和山区立体气候特点，境内不仅现有生物资源丰富，而且具有引种、培育热带和寒带多种动植物的条件[2]。 蚕豆是世界上重要的豆科作物，是中国重要的粮食、蔬菜、副食、饲料、绿肥和养地作物[3]。四川栽培蚕豆有2 000多年的历史，年种植蚕豆约30万hm2[4]，其中凉山、阿坝、甘孜三州生产的大白蚕豆品质好，部分产品以原粮出口创汇，是高原山区的主要增收作物[5]。蚕豆共生体——根瘤菌能够固定空气中的氮合成氨，供植物生长需要，但其共生固氮受到环境条件的限制[6，7]，并有研究指出，某种特殊根瘤菌群的出现与适当的宿主豆科植物、土壤温度、土壤酸碱度、土壤水分含量等有明显的相关性[8]。研究对攀西地区8个县市的14个采样点分离的22株蚕豆根瘤菌进行耐盐性、生长温度、生长pH范围以及对抗生素抗性的测定，为筛选适宜攀西地区环境的高效蚕豆根瘤菌及其遗传多样性的研究打下基础。 1 材料与方法 1.1 供试材料 从四川省攀西地区8个县市14个采样点分离得到22株蚕豆根瘤菌，水培回接全部结瘤，供试菌株情况见表1。 1.2 抗逆性试验 1.2.1 耐盐性测定 在YMA培养基上进行供试菌株的活化培养，后接种于NaCl浓度分别为10、20、30、40和50 g/L的YMA培养基上，以含0.2 g/L NaCl的YMA培养基为对照，重复3次，28 ℃培养7 d观察记录，生长记为“+”，不生长记为“-”。 1.2.2 耐酸碱性测定 以pH 7的YMA培养基为基础培养基，用HCl或NaOH调节培养基pH分别为4.0、5.0、6.0、8.0、9.0、10.0、11.0、12.0，然后将供试菌株接种于不同pH的培养基上，以pH 7.0的培养基为阳性对照，28 ℃培养7 d，观察及记录方法同1.2.1。 1.2.3 生长温度范围测定 将活化纯化的菌株接种于YMA培养基上，分别在8、28、37和60 ℃（其中，37 ℃和60 ℃是指在此温度下热激处理30 min后于28 ℃下培养）下培养7 d，以28 ℃为阳性对照，观察及记录方法同1.2.1。 1.2.4 抗生素抗性测定 选取氨苄青霉素（Amp）、庆大霉素（Gm）、红霉素（Em）、氯霉素（Cm）、四环素（Tc）和卡那霉素（Km）6种抗生素，每种抗生素终浓度分别设定为5、50、100、300 μg/mL 4个浓度梯度。每种抗生素经细菌过滤器过滤除菌后，加入到经高温灭菌处理后冷却至50 ℃左右的YMA培养基中，制成平板，以不加抗菌素的YMA平板为对照，培养观察及记录方法同1.2.1。 以上试验均采用点接种法，每个处理设置3次重复。 2 结果与分析 2.1 耐盐性测定结果 供试的蚕豆根瘤菌对NaCl的耐性普遍较差，81.8%的菌株不能在含10～50 g/L NaCl的培养基上生长，仅有4株菌株能在含10 g/L NaCl的培养基上生长，分别为B1、B2、B3和B15，其中菌株B1、B3还能在试验所设其他浓度（30～50 g/L）的含NaCl的培养基上生长，具有较好的耐盐性。比王庆等[9]测得的蚕豆根瘤菌的耐盐生长范围0.1～0.3 mol/L（5.8～17.6 g/L）广；刁治民等[10]对青海蚕豆根瘤菌进行耐盐回接试验表明，在营养液NaCl浓度为0.1 mol/L（5.8 g/L）时已经不结瘤；何恒斌等[11]对沙冬青根瘤菌进行的耐盐试验指出，在盐渍化滩地采集到的根瘤菌能耐受70 g/L的NaCl。不同菌株耐盐性差异可能与菌株生长的地理环境有关。 2.2 耐酸