(仪器分析）7.4影响分离的因素与操作条件选择.ppt

第七章高效液相色谱分析法 7.4.1 影响分离的因素 7.4.2 分离类型的选择 7.4.3 液相色谱的应用 7.4.4 制备型液相色谱 7.4.1 影响分离的因素 2.流速 7.4.2 分离类型选择 7.4.3 HPLC的应用 2. 稠环芳烃的分析 3. 血浆分析 7.4.4 制备型液相色谱 2. 液相制备色谱的方法 3. 制备型液相色谱 请选择内容 第四节影响分离的因素与操作条件的选择 High performance liquid chromatograph, HPLC Factors influenced separation and choice of operation condition 1. 影响分离的因素与提高柱效的途径 液体的扩散系数仅为气体的万分之一，则在高效液相色谱中,速率方程中的分子扩散项B/u较小，可忽略不计，即： H = A + C u 液体的黏度比气体大100倍，密度为气体的1000倍，故降低传质阻力是提高柱效主要途径。 粒度较大时的LC曲线。 由速率方程，降低固定相粒度可提高柱效。 液相色谱中，不可能通过增加柱温来改善传质。分离过程需要保持恒温。 改变淋洗液组成、极性是改善分离的最直接的因素。 载体粒度较大时的LC曲线。 载体粒度较小时的LC曲线。 流速是调整分离度和出峰时间的重要可选择参数。 3.固定相及分离柱 气相色谱中的固定液原则上都可以用于液相色谱，其选用原则与气相色谱一样。但在高效液相色谱中，分离柱的制备是一项技术要求非常高的工作，一般很少自行制备。 1. 环境中有机氯农药残留量分析 可对水果、蔬菜中的农药残留量进行分析。 固定相：薄壳型硅胶(37 ～50?m) 流动相：正己烷 流 速：1.5 mL/min 色谱柱：50cm?2.5mm(内径) 检测器：示差折光检测器 稠环芳烃多为致癌物质。 固定相：十八烷基硅烷化键合相 流动相：20%甲醇-水 ～100%甲醇 线性梯度淋洗，2%/min 流 速：1mL/min 柱 温：50 oC 柱 压：70 ?104 Pa 检测器：紫外检测器 获得高纯物质（色谱纯）的有效方法。 半制备柱（内径8mm，长度15 ～ 30cm），一次制备量0.1～１mg。 1.色谱柱的柱容量（柱负荷） 对分析柱：不影响柱效时的最大进样量； 对制备柱：不影响收集物纯度时的最大进样量； 超载：进样量超过柱容量。柱效迅速下降，峰变宽。 超载可提高制备效率，以柱效下降一半或容量因子k降低10%为宜。 （1）主峰可获得良好分离；使用制备柱，超载提高效率。 （2）两主成分之间的小组分； 超载，分离切分使待分离组分成为主成分（富集）后，再次分离制备。 制备型液相色谱：结构与分析型一样，但泵流量大，进样量大，采用制备柱，柱后有馏分收集器。 制备柱：内径20～50mm，柱长50cm。 结束 7.1 高效液相色谱的特点与仪器 7.2 基本原理与主要分离类型 7.3 固定相与流动相 7.4 影响分离的因素与操作条件选择 7.5 离子色谱法 * *