丁酸钠对重症急性胰腺炎大鼠肺损伤保护作用.docVIP

丁酸钠对重症急性胰腺炎大鼠肺损伤保护作用 　　[摘要] 目的 探讨丁酸钠对大鼠重症急性胰腺炎（SAP）合并肺损伤的治疗作用。 方法 牛磺胆酸钠逆行胰胆管注射制作SAP动物模型，30只SD大鼠分成对照组、SAP组及丁酸钠（NaB）治疗组，检测胰腺湿/干重比值、胰腺及肺脏病理改变、肺脏细胞凋亡情况。 结果 NaB治疗组肺组织湿/干重比值下降；NaB治疗组胰腺及肺组织病理改变明显减轻。NaB治疗组肺组织细胞凋亡指数显著高于SAP组。 结论 NaB可以有效诱导SAP大鼠肺组织细胞发生凋亡，减轻肺损伤。 [关键词] 丁酸钠；重症急性胰腺炎；细胞凋亡；肺损伤 [中图分类号] R657.5+1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）08（b）-0007-02 重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis，SAP）容易引起全身炎症反应综合征（systemic inflamatory response syndrome，SIRS），如果没有及时控制病情可进一步发展成为多器官功能障碍综合征（multiple organ dysfunction syndrome，MODS），救治困难，死亡率高。多器官中肺损伤最常见，30%的SAP患者可发生明确的急性肺损伤（acute lung injury，ALI）；严重者可发生急性呼吸窘迫综合征（acute respiratory distress syndrome，ARDS）[1-2]。细胞凋亡与SAP及其引起的肺损伤密切相关，胰腺腺泡细胞凋亡可能是急性胰腺炎发生后对机体较为有利的一种反应，诱导胰腺或肺细胞凋亡可以有效减轻局部及全身炎症反应，是治疗SAP的有效途径[3]。丁酸钠（sodium butyrate，NaB）能够诱导肿瘤细胞和多种非肿瘤细胞的凋亡，但NaB诱导肺组织细胞凋亡以及对SAP并发的急性肺损伤治疗作用方面的研究不多，本研究通过建立SAP动物模型，探讨NaB对大鼠SAP的并发症急性肺损伤的治疗作用。 1 材料与方法 1.1 实验动物 健康雄性SD大鼠（吉林大学实验动物中心提供）30只，体重200～250 g，随机分为对照组、SAP组、NaB治疗组，每组各10只。实验前12 h开始禁食，自由饮水。 1.2 主要试剂 牛磺胆酸钠（Sigma公司），加蒸馏水配制成5%的溶液备用；丁酸钠（Sigma公司）；TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒（美国Promega公司）。 1.3 模型制备 参照Aho等[4]的方法制备SAP组动物模型，大鼠于术前12 h禁食，但可以自由饮水。1%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉（0.3 ml/100 g），固定动物消毒，取上腹部正中切口，在手术显微镜下操作，4#头皮针十二指肠外穿刺并找到乳头进入乳头1.0 cm，以动脉夹夹闭肝门及十二指肠远端，注入5%牛磺胆酸钠（剂量0.1 ml/100 g），注射完10 min拔出针头，放开动脉夹，逐层关腹。NaB治疗组即是制作一组SAP模型（10例），手术后10 min通过股静脉途径注射NaB 5 mg/kg。对照组手术过程基本同SAP组，但穿刺十二指肠胰胆管内注射的是等量生理盐水。各组动物于术后12 h在麻醉下剖开腹腔，观察腹水情况，观察胰腺大体病理变化，取胰腺组织用多聚甲醛固定，开胸后观察肺脏，切取右侧肺脏测定肺组织湿/干重比率，并留取左肺上叶标本，以Bouin液固定，供肺组织细胞凋亡（TUNEL）检测。 1.4 检测指标及方法 1.4.1 肺组织湿/干重比值测定 各组大鼠12 h处死后，将称重的肺脏于160℃烘烤24 h后再次称重，计算湿/干重比值。 1.4.2 胰腺及肺组织病理学观测 切取的各组大鼠胰腺及肺组织用多聚甲醛固定，脱水、透明、封片后在光学显微镜下观察胰腺及肺组织的病理学改变，参照Kusske等[5]的方法对胰腺的炎症轻重程度评分。参照Osman等[6]的方法，根据肺实质和空肺泡所占面积的百分比判断肺的炎症及损伤的程度。 1.4.3 肺组织细胞凋亡检测 TUNEL操作步骤按说明书进行，每张切片随机选择5～10个高倍视野，计数1000个肺脏细胞中的凋亡细胞，用百分数表示，作为凋亡指数（apoptosis index，AI）。 1.5 统计学分析 采用SPSS 12.0软件进行统计学分析，计量资料以x±s表示，以P 　　通过本研究发现，细胞凋亡参与了SAP病变发生及进展的全过程，在SAP发生发展过程中起重要作用。NaB是一种无毒的短链脂肪酸[12]。NaB可以抑制体内外肿瘤细胞增殖、促进细胞分化，并阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡的发生[13-14]。但NaB诱导肺组织细胞凋亡以及NaB对SA