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七氟醚抑制人红细胞抗氧化能力实验探究 　　[摘要] 目的 观察七氟醚对人红细胞抗氧化能力的影响，探讨其作用机制。 方法 健康成年人红细胞制成2%悬液，分为8组：单纯空气组（A组）、1%七氟醚组（S1组）、3%七氟醚组（S3组）、5%七氟醚组（S5组）、空气+过氧化氢（H2O2）组（A+H组）、1%七氟醚+H2O2组[（SI+H）组）]、3%七氟醚+ H2O2组（S3+H组）、5%七氟醚+ H2O2组[（S5+H）组）]，各组通醚时间为30 min，孵育15 h后，加入反应浓度为200 μmol/L H2O2，继续孵育3 h后检测溶血率、过氧化氢酶（CAT）及丙二醛（MDA）含量，所得数据用SPSS 13.0软件统计处理。 结果 （S3+H）组溶血率（%）（17.384±1.976）比（A+H）组（10.848±0.274）和S3组（12.417±0.716）明显增加（P = 0.007，P = 0.027）。与A组（17.301±4.222）相比，S3组（5.431±0.531）和S5组（5.175±0.658）CAT含量（U/mgHB）明显降低（P = 0.009，P = 0.009）。（S1+H）组（4.319±0.235）、（S3+H）组（8.257±1.389）和（S5+H）组（9.156±0.742）CAT含量均较（A+H）组（13.689±2.003）明显降低（P 　　1.2.4 H2O2处理通醚后的红细胞 取出孵育后的红细胞，按上述分组方式加入30%的H2O2，使终浓度为200 μmol/L进行处理，不加H2O2组加入等体积的林格氏液作为对照，继续孵育时间为3 h。 1.2.5 实验指标测定 取出孵育后的红细胞，采2 mL红细胞液用林格氏液按照红细胞悬浮液∶林格氏液=4∶5比例稀释，阳性对照组加入2.5 mL蒸馏水，阴性对照组加入林格氏液2.5 mL，37℃孵育30 min。各组样本移入5 mL离心管，2500 r/min离心5 min，取各样本上清液300 μL，加入96孔板，应用酶标仪在415 nm处测定吸光度值，每个样本测3次。 溶血率=（实验组吸光度- 阴性组吸光度）/（阳性组吸光度- 阴性组吸光度）×100%。 当样品溶血率小于0时，溶血率以0计。 其余2 mL红细胞液委托北京华英生物技术研究室进行红细胞中CAT、MDA含量的测定。 1.3 统计学方法 采用统计软件SPSS 13.0对实验数据进行分析，计量资料数据以均数±标准差（x±s）表示，采用One-Way ANOVA方法分析，多组间两两比较采用LSD-t检验。计数资料以率表示，采用χ2检验。以P 0.05）。（S3+H）组溶血率[（17.384±1.976）%]大于（A+H）组[（10.848±0.274）%、（S5+H）组[（9.777±0.576）%]和S3组，差异有统计学意义（P = 0.007，P = 0.007，P = 0.027，P 0.05）。（S1+H）组MDA含量[（3.547±0.898）μmol/g HB]大于（A+H）组[（2.654±0.509）μmol/g HB]，差异有统计学意义（P = 0.031 0.05）。见表3。 3 讨论 生物的代谢过程中，氧分子在线粒体呼吸和（或）胞浆代谢中发生不完全还原反应产生ROS[10]。包括H2O2、羟自由基和超氧阴离子等，它们可以破坏生物大分子如生物的脂膜、核酸和蛋白质等而产生严重的生物效应，如谷胱甘肽的耗竭、脂质过氧化及蛋白质和核酸的氧化等[11-12]。红细胞内ROS的主要来源为血红蛋白（Hb）。其产生机制为，Hb中的血红素铁与氧之间的Fe-O键极化后，Hb发生自发氧化产生过氧化物。而红细胞自身存在一系列酶可保护细胞免受ROS的损伤。这些酶主要包括Cu-Zn超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（CAT）、高铁血红蛋白还原酶、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和一类新出现的抗氧化酶同源家族peroxiredoxins（Prxs）[13]。 CAT是一类以铁卟啉为辅基的结合酶，具有较强的自由基清除功能，对组织的氧化损伤有防护作用[14]。H2O2在CAT的作用下转化为水和分子氧[15]，CAT在灭活H2O2的同时消耗增加，从而造成其活性下降。MDA为脂质过氧化终产物，测试MDA的量可反映机体内脂质过氧化的程度，间接地反映出细胞损伤的程度[7-9]。 H2O2是细胞在有氧环境中的代谢产物，是一种主要的活性氧分子，具有重要的生物学功能，包括充当信号分子，调节细胞分裂、分化、迁移、衰老或死亡[16]。H2O2诱导细胞氧化损伤的程度，主要取决于氧化应激因素的强弱。对内皮细胞研究发现，大剂量H2O2（0.5 mmol/L