6实验1-2 蛋白质的性质实验.doc

实验1－2 蛋白质的性质实验（二） 蛋白质的沉淀反应 目的和要求： 1、加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。 2、了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。 3、了解蛋白质变性与沉淀的关系。 二、原理 在水溶液中的蛋白质分子由表面生成水化层和双电层而成为稳定的亲水胶体颗粒，在一定的理化因素影响下，蛋白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。 蛋白质的沉淀反应可分为两类： （1）可逆的沉淀反应：此时蛋白质分子的结构尚未发生显著变化，除去引起沉淀的因素后，蛋白质的沉淀仍能溶解于原来的溶剂中，并保持其天然性质而不变性。如大多数蛋白质的盐析作用或低温下用乙醇（或丙酮）短时间作用于蛋白质，提纯蛋白质时，常利用此类反应。 （2）不可逆沉淀反应：此时蛋白质分子内部结构发生重大变化，蛋白质常变性而沉淀，不再溶于原来溶剂中，加热引起的蛋白质沉淀与凝固，蛋白质与金属离子或某些有机酸的反应都属于此类。 蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在（如电荷），并不析出，因此变性的蛋白质并不一定都表现为沉淀，而沉淀的蛋白质也未必都已变性。 三、操作方法： （1）蛋白质的盐析 加5％卵清蛋白溶液2毫升于试管中，再加等量的饱和硫酸铵溶液，混匀后静置数分钟则析出球蛋白的沉淀，倒出少量浑浊沉淀，加少量水，是否溶解？为什么？将管内溶液过滤，向滤液中添加硫酸铵粉末到不再溶解为止，此时析出的沉淀为清蛋白，取出部分清蛋白，加少量蒸馏水，再观察沉淀的再溶解。 （2）重金属离子沉淀蛋白质 取一支试管，加入蛋白质溶液2毫升，再加入3％AgNO31—2滴，振荡试管，有沉淀生成，放置片刻，倾出上清液，向沉淀中加入少量的水，沉淀是否溶解？为什么？注意使用醋酸铅或硫酸铜沉淀蛋白质时不可过量，否则引起沉淀的再溶解，不妨以实验验证之，取一支试管加入约1毫升蛋白质溶液，加入1％CuSO4观察至有沉淀，再继续加入过量的CuSO4，观察沉淀消失，当然也可用0.5％的醋酸铅进行验证。 （3）某些有机酸沉淀蛋白质 取一支试管，加入蛋白质液2毫升，再加入1毫升5％三氯乙酸溶液，振荡试管，观察沉淀的生成，放置片刻，倾出上清液，向沉淀中加入少量水，观察沉淀是否溶解。 （4）有机溶剂沉淀蛋白质 取一支试管，加入2毫升蛋白质溶液，再加入2毫升95％乙醇，混匀，观察沉淀的生成。 （5）加热沉淀蛋白质 几乎所有的蛋白质都因加热变性而凝固，变成不可逆的不溶状态，盐类和氢离子浓度对蛋白质加热凝固有很大影响，少量盐类促进蛋白质的加热凝固，当蛋白质处于等电点时，加热凝固最完全、最快速。在酸性或碱性溶液中，蛋白质分子带有正电荷或负电荷，虽加热蛋白质也不凝固，若同时有足量的中性盐存在，则蛋白质可因加热而凝固。 取5只试管，编号，按下表加入有关试剂，将各管摇匀，观察，然后放入沸水浴中加热10分钟，注意观察比较各管的沉淀生成情况。 蛋白质 溶液 0.1％ 醋酸 10％醋酸 饱和NaCl 10％NaOH 蒸馏水 实验结果 1 10滴 7滴 2 10滴 5滴 2滴 3 10滴 5滴 2滴 4 10滴 5滴 2滴 5 10滴 2滴 5滴 四、试剂与材料 （1） 蛋白质溶液：5％卵清蛋白液或鸡蛋清的水溶液（蛋清：水＝1：9） （2） 3％AgNO3 （3） 95％乙醇 （4） 5％三氯乙酸 （5） 饱和硫酸铵溶液 （6） 硫酸铵结晶粉末 （7） 0.1％醋酸 （8） 10％醋酸 （9） 饱和NaCl （10）10％NaOH 思考题： 1、为什么鸡蛋清可用作铅中毒或汞中毒的解毒剂？ 2、如何解释上述实验现象？ 实验1－3 酶的抑制剂与激活剂及温度对酶活性的影响 一、目的和要求： 1、加深对酶性质的认识 2、了解酶促反应的激活与抑制，学习检测激活剂和抑制剂影响酶反应的方法和原理。 二、实验原理： 酶的活性常受到某些物质影响，有些物质能增加酶的活性，称为酶的激活剂；另一些物质则降低酶的活性，称为抑制剂。 很少量的激活剂或抑制剂就会影响酶的活性，而且常具有特异性（值得注意的是激活剂和抑制剂不是绝对的，有些物质在低浓度时为某种酶的激活剂，而在高浓度时则成为该酶的抑制剂，NaCl是唾液淀粉酶的激活剂，但NaCl浓度到1/3饱和度时就可抑制唾液淀粉酶的活性）。 酶的催化作用受温度的影响，在最适温度下，酶的反应速度最大，大多数动物酶的最适温度为37-40℃。植物酶的最适温度为50-60℃。酶对温度的稳定性与其存在形式有关，有些酶的干燥剂，虽加热到100℃，其活性并无明显改变，但在100℃的溶液中却很快的完全失去活性。低温能降低或抑制酶的活性，但不能使酶失活。 三、操作方法 1、酶的激活剂与抑制剂 管号 1 2 3 4 0.1％淀粉溶液（ml） 1.5 1.5 1.5 1.5 1％CuS