减毒李斯特菌载体运送HPV16E7基因重组疫苗的.PDFVIP

生 物 工 程 学 报 贾艳艳 等/减毒李斯特菌载体运送HPV16 E7 基因重组疫苗的构建及其生物学特性 683 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn May 25, 2016, 32(5): 683−692 DOI: 10.13345/j.cjb.150413 ©2016 Chin J Biotech, All rights reserved 医学与免疫生物技术 HPV16 E7 贾艳艳，殷月兰，谈卫军，段斐斐，潘志明，陈祥，焦新安 225009 , , , . HPV16 E7 . , 2016, 32(5): 683–692. Jia YY, Yin YL, Tan WJ, et al. Construction and characterization of an attenuated recombinant Listeria monocytogenes vector vaccine delivering HPV16 E7. Chin J Biotech, 2016, 32(5): 683–692. 摘 要: 单核细胞增生李斯特菌 (Listeria monocytogenes , LM) 是一种理想的肿瘤疫苗载体，本文旨在构建表 达人乳头瘤状病毒 (HPV) 16 型 E7 蛋白的减毒重组李斯特菌疫苗候选株并分析其生物学特性。利用同源重组 技术将HPV16 E7 基因定点整合至LM hly 基因信号肽序列下游，获得减毒重组李斯特菌LM4△hly ::E7，并对 该重组菌进行生物学特性研究。实验结果表明，重组菌能够分泌表达具有免疫学活性的E7-LLO 融合蛋白，大 小约66 kDa；通过激光共聚焦扫描显微镜观察到重组菌能够在RAW264.7 细胞胞内增殖。ELISA 测定结果显 示减毒重组菌能够诱导小鼠产生E7 特异性抗体。重组菌在C57BL/6 小鼠中LD50 为3.863×109 CFU ，低于亲本 株4 个数量级，通过组织切片观察到重组菌对小鼠肝脏及脾脏无明显病理变化。以上表明，本研究构建的分泌 表达E7-LLO 融合蛋白的减毒重组李斯特菌具有较好的安全性，为下一步研究其抗肿瘤作用提供了材料，并为 研发宫颈癌的免疫治疗型候选疫苗奠定重要基础。 : 减毒单核细胞增生李斯特菌，人乳头瘤状病毒 16 型 E7 蛋白，巨噬细胞系，安全性 Received: September 29, 2015; Accepted: December 21, 2015 Supported by: National Natural Science Foundation of China (Nos., Priority Academic Program Development of Jiangsu Higher Education Institutions. Corresponding author: Xin ′an Jiao. Tel: +86-514 Fax: +86-514 E-mail: jiao@ (Nos. 684 ISSN 1000-3061 CN 11-1998/Q Chin J Biotech May 25, 2016 Vol.32 No.5 Construction and characterization of an attenuated recombinant Listeria monocytogenes vector vaccine delivering HPV16 E7 Yanyan Jia, Yuelan Yin, Weijun Tan, Feifei Duan, Zhiming Pan, Xiang Chen, and Xin′an Jiao Jiangsu Co-Innovation Center for P