FCM参考样品.pptVIP

参考样本的制备方法 ㈡生物性标准样品 生物细胞标准样品 ⑶ 人淋巴细胞悬液： 作为适用的调整流式细胞的生物性参考样品，并已被确认为一致可靠的二倍体细胞DNA含量的参考标准，在肿瘤细胞DNA倍体的研究中，已广泛用于DNA倍体的计算标准 参考样本的制备方法 ㈡生物性标准样品 生物细胞标准样品 ⑷ 元鱼血细胞： 元鱼血细胞的核DNA含量相对于人二倍体细胞的70%左右，其核DNA含量均一，形态大小一致，国内已有作者采用元鱼细胞作为流式细胞仪的参考指标 参考样本的制备方法 ㈡生物性标准样品 生物细胞标准样品 ⑷ 元鱼血细胞： 其变异系数可达1.8%左右，远低于鸡血红细胞。其来源丰富，制备简单，一只元鱼可取10ml血液，在－80oC冰箱终保存两年以上无任何变化，是理想的生物性内参标准细胞。 DNA定量分析参考标准 Tiersch等选择了39种脊椎动物细胞，应用FCM定量分析这些动物二倍体细胞的DNA含量，用于DNA含量分析的参考标准细胞 DNA定量分析参考标准 DNA定量分析参考标准 DNA定量分析参考标准 标本采集: 使用人末梢血白细胞，牛、狗、猪、鼠、马采用末梢血白细胞，其他动物均采用全血细胞，(这些动物的全血细胞均为有核红细胞) DNA定量分析参考标准 标本采集: 他们还提出DNA含量的计算公式，DNA含量的单位以微微克或沙克Pico gram. Pg 10-9/克来表示 DNA定量分析参考标准 PG＝7.0(X/S) (S/H) 7.0：二倍体淋巴细胞DNA含量值 X：实验细胞组方图中G0/1期细胞 峰的均道值 H：人淋巴细胞G0/1峰细胞均道值 S：内参考标准细胞G0/1峰的均道值 DNA定量分析参考标准 Announcements: 1 对于标准样品细胞DNA含量的计 算，不能使用染色体条数计算 DNA含量 DNA定量分析参考标准 Announcements: 人类的二倍体细胞有46条染色体(DNA含量为7.0)，在东南亚有一种小鹿仅有6条染色体，但其二倍体细胞DNA含量与人二倍体细胞DNA含量相似，家马的二倍体细胞染色体为64条，但其二倍体DNA含量比人的二倍体细胞还少约10% DNA定量分析参考标准 Announcements: 2 在使用标准样品的过程中，不同的染色和不同的固定剂都会出现不同的定量分析结果，人的淋巴细胞与鸡血红细胞，鳟鱼和元鱼红细胞DNA含量的所测比值 DNA定量分析参考标准 DNA定量分析参考标准 Announcements: 还有报道标准样品的保存温度和保持时间也会对测定结果准确性产生影响，因此在使用标准样品是应严格遵照同样染色方法和固定方法 肿瘤DNA倍体标准 近年来，FCM应用最广泛，最多的领域是肿瘤细胞DNA含量的定量研究，使肿瘤研究从定性研究提高到定量研究的分子学水平，并发现DNA含量这一参量与肿瘤的恶性分级，预后，治疗等有一定的关系 肿瘤DNA倍体标准 因此，恶性肿瘤DNA倍体的研究成为近年肿瘤研究的最新进展之一，为准确地定量细胞DNA含量，人们发展使用一系列定量DNA含量的标准样品 肿瘤DNA倍体标准 ㈠新鲜组织细胞DNA倍体定量标准 ㈡石蜡包埋肿瘤组织DNA倍体分析的标准 肿瘤DNA倍体标准 ㈠新鲜组织细胞DNA倍体定量标准 FCM DNA定量研究早期，多以新鲜组织细胞为定量分析的样品，使用的DNA定量标准最多的是鸡红细胞DNA含量作为内参考标准（35%)，后又使用了虹鳟鱼红细胞DNA(80%)。 我国学者宋平根等发展是用了鳖红细胞DNA含量作为内参考标（70%） 肿瘤DNA倍体标准 ㈠新鲜组织细胞DNA倍体定量标准 以上几种参考标准细胞既可作为仪器的准直样品，又可作为DNA定量的标准样品。但经过大量的研究实践后，人们发现使用上述标准样品定量DNA含量存在较大误差，在不同的正常组织的二倍体细胞DNA含量之间，在不同的实验室之间，都存在DNA含量分析结果的较大差异 肿瘤DNA倍体标准 ㈠新鲜组织细胞DNA倍体定量标准 因此，为了使FCM DNA定量具有更精确的可靠性和重复性，有必要建立起FCM DNA定量分析的质量检测标准 肿瘤DNA倍体标准 ㈠新鲜组织细胞DNA倍体定量标准 1984年，在洛杉矶召开国际细胞分析学会,就DNA含量分析的二倍体细胞标准作出了规定：在DNA定量分析时，一般应用同种同一个体的正常细胞DNA含量作为二倍体细胞的标