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复苏期输入全血对失血性休克小鼠保护作用 　　DOI：10.3760/cma.j.issn.1671-0282.2013.09.015 基金项目：浙江省医药卫生科技计划项目（2012KYA110） 作者单位：310016 杭州， 浙江大学医学院附属邵逸夫医院肛肠外科（陈琳琳、王达），普外科（杨进） 通信作者：杨进， Email：dryangjin@163.com 创伤所致失血性休克是临床上常见的危急重症，全世界每年大约有超过30万人死于失血性休克[1]。在早期止血的基础上，液体复苏是治疗失血性休克的重要手段。值得重视的是，失血性休克引起的组织缺血以及复苏治疗后的再灌注会产生剧烈的系统性炎症反应，导致以急性肺损伤为主要表现的器官损伤[2]。既往研究发现，在失血性休克大鼠复苏期输入全血具有一定保护作用，可以降低早期和晚期病死率[3]，但其对炎症反应是否具有改善作用还不得而知。本实验拟研究复苏期输入全血对失血性休克小鼠炎症反应、血管通透性和肺损伤的保护作用，并与传统的林格氏液进行比较。 1 材料与方法 1.1 实验动物与材料 健康成年清洁级雄性昆明种小鼠80只[南京医科大学实验动物中心提供，许可证号SCXK（苏）2010-002]，体质量20～25 g。戊巴比妥钠（索莱宝生物科技有限公司）；肝素钠注射液（江苏万邦生化医药股份有限公司）；林格氏液（杭州民生药业集团有限公司）；白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-10（IL-10）、巨噬细胞炎症蛋白-1α（MIP-1α） Elisa试剂盒（RD公司）；伊文思蓝（Evans Blue，美国Sigma公司）；甲酰胺（美国Amresco公司）；BL-420F生物信号采集系统（成都泰盟科技有限公司）。 1.2 方法 1.2.1 动物分组与模型制备 取小鼠20只，分别通过眼球取血1 ml，血液经1000 U/ml肝素抗凝，37 ℃保存以用于小鼠复苏期的输入，已知小鼠异体输血不会引起免疫反应或炎症因子的显著变化，但是会增加肿瘤小鼠肿瘤的增殖[4-5]。另取60只小鼠，随机（随机数字法）分为3组：假手术组、全血组和林格氏液组（林格组），每组20只。各组小鼠以戊巴比妥钠100 mg/kg腹腔内注射麻醉后，固定在37 ℃的保温垫上以保持体温恒定。分离小鼠左侧股动、静脉，均进行插管，其中股动脉插管连接到BL-420F生物信号采集系统监测动脉收缩压（SBP），手术开始后每隔10 min记录一次。各组小鼠经股静脉插管注射肝素钠生理盐水200 U/kg，达到全身肝素化。假手术组不放血及复苏，其余两组小鼠参照文献[6]的方法略有改动制备未控制性出血性休克复苏模型。经股静脉缓慢放血3 min，使收缩压降至25 mm Hg（1 mm Hg=0.133 kPa），维持60 min，放出的血液保存于干燥的肝素抗凝试管中，若SBP高于25 mm Hg，则继续少量放血，若SBP低于20 mm Hg，则回输少量全血或林格氏液。休克维持60 min后进入复苏期，即静脉输入大量全血或林格氏液，使小鼠收缩压升高至80 mm Hg左右，复苏期维持在30 min，记录复苏期各种溶液的输入量。 1.2.2 观察指标 复苏期结束后各组10只小鼠取血，分离血清，根据试剂盒说明检测IL-1β、IL-6、IL-10和MIP-1α的含量，并取各鼠肺组织10%甲醛固定，常规脱水，石蜡包埋，制成切片，苏木素-伊红（HE）染色后光镜下观察肺组织的病理变化。同时，各组另外10只小鼠，在复苏期结束后通过股动脉注射伊文思蓝20 mg/kg，循环20 min后取肺组织，用20 U/ml的PBS液进行灌洗，在100 mg/ml的甲酰胺中37 ℃孵育后检测肺组织伊文思蓝含量，以反映肺毛细血管通透性的变化。使用伊文思蓝法检测血管通透性，由Saria和Lundberg[7]在1983年首创，是一种经典的检测血管通透性的方法。 1.3 统计学方法 数据采用SPSS 11.0统计软件进行处理，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，统计资料采用单因素方差分析，组间比较采用方差分析（LSD-t检验），以P0.05）。两组小鼠在复苏期分别输入全血（0.59±0.10）ml和林格氏液（0.89±0.14）ml，输液量比较差异有统计学意义（P 　　A：假手术组；B：全血组；C：林格组 图2 各组小鼠肺组织的病理形态学改变（HE×200）3 讨论 失血性休克是创伤患者死亡的主要原因之一，这些失血引起的死亡大多发生在创伤后最初的6 h[8]。对创伤失血性休克最有效的治疗是止血，但确定性的止血措施并不总能马上进行。因此，利用液体复苏来恢复终末器官灌注和组织氧供就显得极为重要