强直性脊柱炎和HLA—B27基因亚型动态定量表达相关性探究.docVIP

强直性脊柱炎和HLA—B27基因亚型动态定量表达相关性探究 　　【摘要】 目的：探讨不同HLA-B27基因亚型与强直性脊柱炎的相关性及其动态表达量与强直性脊柱炎疾病活动指数（BASDAI）的关系。方法：收集骨科门诊强直性脊柱炎患者应用流式细胞术定性检测HLA-B27阳性100例，HLA-B27阳性健康对照组30例，通过PCR-SSP（序列引物扩增法）技术检测HLA-B27基因亚型；荧光实时定量RT-PCR技术检测HLA-B27阳性AS患者及HLA-B27阳性健康对照组HLA-B27亚型的mRNA，统计分析两组HLA-B27mRNA 表达量及HLA-B27阳性患者HLA-B27mRNA 表达水平与强直性脊柱炎患者疾病活动指数的相关性。结果：100例AS患者检出HLA-B2704亚型55例，HLA-B2705亚型45例，30对照组检出HLA-B2704亚型13例，HLA-B2705亚型12例，HLA-B2706亚型3例，HLA-B2709亚型2例；HLA-B27阳性患者HLA-B27mRNA 表达水平最低值为1.16，最高值为37.01，均值7.77，HLA-B27阳性健康对照组表达水平最低1.05，最高值2.10，均值为1.51，两组差异有统计学意义（P=0.002）；HLA-B27阳性患者HLA-B27mRNA 表达水平与强直性脊柱炎患者疾病活动指数密切相关（R=0.707）。结论：本地区AS患者HLA-B27基因亚型以B2704和B2705为主，B2706及B2709可能为保护亚型；HLA-B27阳性患者HLA-B27mRNA 表达水平高于HLA-B27阳性健康者；HLA-B27阳性患者HLA-B27mRNA 表达水平与强直性脊柱炎患者疾病活动指数呈正相关。 【关键词】 强直性脊柱炎； HLA-B27； 基因； 亚型； 定量； 动态表达 强直性脊柱炎（Ankylosing Spondylitis AS）是一种类风湿因子阴性，主要累及中轴关节和肌腱韧带附着点的慢性进行性炎症疾病，可引起腰痛、晨僵、脊柱活动受限、驼背畸形、外周关节受累、肌腱端炎、足跟痛等关节症状以及眼部前葡萄膜炎、心血管表现、肺部表现、骨质疏松等关节外症状，AS致残率高，早期确诊对AS患者非常重要。AS与HLA-B27（Human Leucocyte Antigen B27，人类白细胞抗原B27）关系密切已被公认，90%以上的AS患者HLA-B27呈阳性。人们发现HLA-B27在基因水平上存在较大异质性，存在多个等位基因，不同亚型有着不同的地域和人种分布特点。另外HLA-B27同一亚型在不同人群中与AS的关联也可不同。本研究将对东莞地区HLA-B27阳性患者及健康人的HLA-B27基因亚型进行检测，揭示本地区主要致病亚型及可能的保护亚型，并从HLA-B27基因亚型的动态表达量揭示与AS的相关性，为本地区AS的防治提供理论依据。 1 资料与方法 1.1 一般资料 2010年3月-2012年12月本院骨科门诊HLA-B27阳性的AS确诊患者100例（符合1983年修订的纽约标准），男81例，女19例， 年龄13～70岁，平均（29±8.37）岁；HLA-B27阳性健康对照组30例，男24例，女6例，年龄14～65岁，平均（30±6.45）岁。两组年龄、性别等一般资料比较差异无统计学意义（P0.05），具有可比性。 1.2 方法 1.2.1 试验仪器与试剂 BDcanto2流式细胞仪由美国BD公司生产，HLA-B27荧光抗体F1（FITC）、CD3荧光抗体F2（PE）、校准微球和溶血素均来自BD公司。PCR仪器购自上海宏石SLAN，高速离心机购自ACI公司，型号PK121R。电泳仪购自Bio-Rad公司，型号PvowerPAC200，全血DNA提取试剂盒、PCR试剂盒购自宝生物大连有限公司，DNA测序仪由美国ABI公司生产，型号3130。 1.2.2 应用流式细胞术定性检测外周血T淋巴细胞HLA-B27 定性检测：抽取HLA-B27阳性AS患者及HLA-B27阳性健康对照组外周静脉血100 uL，EDTA抗凝，采用BD公司HLA-B27试剂盒，按照说明书步骤进行，在BDcanto2流式细胞仪上检测，结果判断为阴性/阳性。 1.2.3 HLA-B27基因亚型测定 采用PCR-SSP（序列引物扩增法）技术检测HLA-B27阳性AS患者及HLA-B27阳性健康对照组HLA-B27亚型的DNA。酚氯法提取外周血液细胞DNA，按照WHO2009年公布的44个HLA-B27等位基因，选择相关亚型的引物试剂盒，进行DNA扩增，凝胶电泳分离并用荧光染色来检测PCR反应的最终产物。 1.2.4 HLA-B27亚型的mRNA