microRNA-的研究进展(整合版).pptxVIP

MicroRNA的研究进展;microRNA生物学特征及功能;1.microRNA的生物学特征及功能;; 小RNA分子本身又包含了若干类RNA，根据小RNA 的生成、结构和功能大约可分为以下三类：;micoRNA(miRNA);microRNA的生物学特征; 时序表达特异性 在不同组织、不同发育阶段中，microRNA的表达水平有显著差异。一些microRNA呈时间发育特异性表达，Neilson JR 等研究表明在细胞发育的不同阶段mRNA表达是动态调控的。Ason B等研究发现，不同物种间许多microRNA 表现高度保守性，mRNA 表达变化越大，生理差别越大。物种间的差别最主要是由于microRNA 表达的异时性变化和较小程度的空间表达差异。由此，可以推测microRNA 表达的变化可能在动物发育过程中形成生理差别是其作用。 ; 组织表达特异性 一些microRNA 表达具有细胞和组织特异性，如miR-17～20位于Hela细胞同一基因簇内，并在斑马鱼细胞中表达，但在鼠肾和蛙卵巢细胞中未检测到。这种特异性对microRNA 的调控功能有重要意义。 miRNA独有的特征：其5’端第一个碱基对U有强烈的倾向性，而对G却有抗性，但第二到第四个碱基缺乏U，一般来讲，除第四个碱基外，其他位置碱基通常都缺乏C ; miRNA执行一定的生物学功能：;2.microRNA的加工成熟;miRNA的生成需要两个步骤：;首先由基因组转录形成长链RNA分子——pri-miRNA;Pri-miRNA经双链RNA核酸酶Drosha酶作用，加工形成70-100nt长度的pre-miRNA;Pre-miRNA在Exportin5介导作用下转运出胞核至胞质中进行下一步加工;Pre-miRNA在胞质中经双链RNA核酸酶Dicer酶作用加工形成单链成熟miRNA分子;3.microRNA的作用机制;;miRNA对靶基因的作用机制一直是众多研究人员的关注热点。最早发现的两个miRNA—lin4和let-7被认为是通过不完全互补结合到靶基因mRNA 3’UTR，以一种未知的方式抑制蛋白翻译，进而抑制蛋白合成，阻断mRNA的翻译过程。后来的研究也发现，多个果蝇miRNA和它们的靶基因mRNA的3’UTR存在部分同源。但由于有miRNA与其目标靶之间的互补是不完全的。用生物信息学的方法鉴定miRNA的目标靶位点并非易事。 在植物中，由于miRNA与潜在的靶基因是完全互补的，使得植物的miRNA靶预测相对较容易。但这些预测基因是否就是miRNA的靶基因，还需要作进一步验证。;研究表明，microRNA基因是一类高度保守的基因家族，按其与靶基因的作用模式不同，主要可分为以下三种类型。 1）作用时与靶基因完全互补结合，作用方式和功能与siRNA非常类似，最后切割靶mRNA，常见于植物； 2）作用时与靶基因不完全互补结合，进而阻止翻译而不影响mRNA的稳定性，这是目前发现最多的作用模式，常见于动物。 3）具有以上两种作用模式，当与靶基因完全互补结合时，直接靶向切割mRNA，当与靶基因不完全互补结合时，阻止靶基因的翻译。 ;miRNA对靶基因的调控，正如前所述，pre-miRNA由exportin-5输出至胞浆中，然后释放pre-miRNA。pre-miRNA与Dicer互补结合，产生长度为22nt的不完全配对的双链RNA（dsRNA）。双链中的一条为成熟的miRNA，另一条则为它的互补链。最后，双链中成熟的miRNA与RNA诱导的RISC结合，随后与靶mRNA互补。而互补链没有结合RISC，因此在体内是趋于降解的。 对miRNA来说，发挥对靶基因的调控作用，Dicer和RISC是必不可少的。因为Dicer是产生miRNA不可或缺的，而RISC则是miRNA实现功能的载体。;miRNA介导的RISC简称miRISC（miRNA-containing RNA induced silencing complex），也被称作miRNA核糖核蛋白复合体（miRNP）。miRISC复合体除了包括成熟miRNA外，还包含Dicer蛋白和多种其他相关蛋白。其与RISC结合的原理与siRNA类似。以dsRNA为例，当双链中两根支链的稳定性相似或相同时，它们结合进入RISC的概率也相似或相同，因此称为等势结合。当双链中支链的稳定性相对较弱时，解旋酶会从稳定性弱的一支解开dsRNA，从而会偏向性地产生一条结合到RISC复合体上，这类结合称为优势结合，未进入RISC的互补链RNA会很快降解。;RISC是miRNA参与靶基因调控过程中不可或缺的载体。在miRISC复合体中，Dicer对pre-miRNA的处理与双链螺旋的解旋是偶联进行的。通常，只有一条链进入miRNA，具体选择双链中哪一条链取决于