测定纤维素酶活性的非技术性因素.pdf

江苏农业科学 2013年第41卷第 11期 ．．——365--—— 许继飞，张艳芬，张一帅，等．测定纤维素酶活性的非技术性因素[J]．江苏农业科学，2013。41(11)：365—367 测定纤维素酶活性的非技术性因素 许继飞，张艳芬，张一帅，赵 吉，关 燕 (内蒙古大学环境与资源学院，内蒙古呼和浩特010021) 摘要：纤维素酶活是酶解纤维素能力大小的指标，是纤维素酶的重要特性之一。由于纤维素酶和纤维素都具有极 其复杂的结构体系，因此只有全面掌握纤维素酶活的测定技术，才能准确获得纤维素酶的活力。本文从测定纤维素酶 活的底物、缓冲液、反应装置、反应终止条件、酶解定糖、计算方法等方面进行了总结，分析了影响纤维素酶活测定的非 技术因素，并给出解决措施。 关键词：纤维素酶活 ；非技术性因素；方法；应对措施 中图分类号：Q814 文献标志码：A 文章编号：1002—1302(2013)11—0365—03 纤维素酶是一种多组分的复合酶，现已确定纤维素酶含 在测定酶活时要注意选择底物。目前单一酶活力的测定，常 有3种主要组分，即内切型一JB一葡聚糖 (纤维二糖水解)酶 采用微晶纤维素(avice1)、羧甲基纤维素(carboxymethylcellu— [endo一 一gluca~ase(EG)或C]、外切型一卢一葡聚糖 (纤维 lose，CMC)、纤维二糖 (cellubiose)为底物，通过纤维素酶水解 二糖水解)酶[ceUobiohydrolase(CBH)或C，] 一葡萄糖苷糖 获得的还原糖量来表示。其中，用Avicelase表示 CBH活力 ， (纤维二糖)酶[cellobiase(CB)或卢一glucosidase(BG)]I【。 CMCase表示 EG活力，Cellobiase表示 CB活力。对于纤维素 只有在这3种酶的协同作用下才能有效将纤维素水解成葡萄 酶的总活力，则采用滤纸酶活来表示，即用特定滤纸为底物， 糖 ，每一种酶的活性均影响整个纤维素酶的活性。为便于研 经酶水解后生成还原糖的量来表示纤维素酶的总活力，称为 究纤维素酶的活性 ，研究者提出了一些可以测定单酶及总酶 滤纸酶活(filterpaperactivity，FPA) 。 活性的方法 ，其中应用最广泛的方法是测定底物酶解后还原 一 般来说 ，在测定 FPA时一般选用 WhatmanNo．1滤纸 糖的生成量 ，间接得出酶的活力 。由于纤维素酶、纤维素 或新华 中速定性滤纸，大小均为 1cmx6cm。在测定 都有极其复杂的结构体系，因此只有全面掌握纤维素酶活力 CMCase和Avicelase酶活时，由于微晶纤维素具有不同结晶 测定的技术与方法 ，才能准确、快速获得纤维素酶的活力。本 度，而羧甲基纤维素具有不同黏度，不同结晶度和黏度表明其 研究分析了影响纤维素酶活测定的非技术因素，同时给出了 具有不同结构 ，因此一般选用 Sigma公司(瑞士)生产的羧甲 一 些建议及解决办法，以期为快速准确测定纤维素酶活提供 基纤维素钠 (CMC—Na)和 AvicelPH101，质量分数均为 指导。 0．5％。对于Cellobiase酶活的测定，选用分析纯级的纤维二 糖就可以达到测定要求，质量分数也为0．5％。 1 纤维素酶的选用和处理 3 测定纤维素酶活的反应装置及条件 纤维素酶作为一种水解纤维素的主要酶系，在工业上已 得到广泛应用，能生产纤维素酶的企业有很多，因此可以根据 3．1 缓冲液的选择及配制 需要选择不同种类和价格的纤维素酶。一般来说科研用酶的 大多数纤维酶都是酸性酶，一般pH值为4．0—5．0时有 价格比较昂贵，如诺维信 CelluclastL1．5；而工业用酶则