不同侵染时间对马铃薯微型薯遗传转化的影响.pdfVIP

ACADEMICFORUM 摘要：农杆菌介导的马铃薯微型薯的遗传转化是目前植物遗传转化的主要方式。农杆菌培养液侵染马铃薯微型薯片 是本实验主要方法，实验主要研究了侵染时间对不同品种马铃薯微型薯片的影响，结果显示：侵染时间不同，结果 有较大差异，侵染时间为3—8mln时，侵染结果最佳，但是，随着侵染时间的延长，农杆菌的富裕生长，使得微型薯 污染而无法出芽。由此得知，侵染时间为8mln是最佳出芽时间，也是污染率最低的侵染时间。 关键词：农杆菌，遗传转化，微型薯； 包梅年田攀兰州理工大学 一刖吾 角瓶，滤纸，无菌水，无菌手术刀，无菌镊子无菌培养皿。 农杆菌介导的微型薯的遗传转化是目前植物遗传转化的主要 方式。微型薯是继脱毒试管苗之后发展起来的保存种质和生产无病 LBA4404，Favorita、大西洋、甘薯3号、青薯9号。 毒种薯的一种新形式。自20世纪80年代初诱导马铃薯试管微型薯 获得成功以来，有关这方面的研究国内外取得了较大的进展。利用 10昏Yeast 离体培养条件诱导马铃薯试管薯生产无病毒的微型薯在脱毒试管 高压灭菌。 薯种薯生产及种质资源保存上发挥着越来越重要的作用【1]． 植物基因工程的发展要求建立一种简便、快速、有效的遗传 Extract(酵母提取物)：59，Nacl(氯化钠)：1og，Agar(琼脂)：159 转化系统，把外源基因导入受体细胞，进而从转化的细胞中再生出 pH7．o，高压灭菌。 完整的工程植株。在这一实验体系中，一方面要求探寻合适的外 源基因载体及相应的受体，另一方面还应摸 实验过程 索建立切实可行的转化系统。根癌农杆菌是目前应用于植物 采用农杆菌介导的马铃薯试管薯薄片遗传转化方法【3】。 遗传转化的一类农杆菌，其中含有Ti质粒，在农杆菌感染植物受伤 部位时，Ti质粒内的一特定片段能共价地整合到植物染色体上进 挑取4℃存放于平板中的单菌落于2ml的试管中，培养基中加入 行复制、转录和表达。T—DNA上有生长素和细胞分裂素合成基 50mg／L砘f、50m∥LKaIl的抗生素，28℃活化过夜【4】。 因嘲；踮们转移到植物中后能进行表达，产生出大量植物激素，从 2)，次日待试管中絮状沉淀较高时，按1／100de接种量接种于 而使植物产生冠瘿癌瘤[2]。 同样含有somg／L 荡培养至oD600=o．6。 该实验通过农杆菌菌株对马铃薯普通栽培种Favorita、大西 洋、甘薯3号、青薯9号的微型薯切片的侵染，不同的侵染的时间对 这四个马铃薯品种的遗传转化出芽的影响。 无明显沉淀则重复离心，然后将沉淀在30“无抗生素LB培养基汇 总重新悬浮。 二实验仪器、材料和试剂 4)取出保存的微型薯块，并将薯块剪切成2mm厚度的薯片， 一、仪器：台式高速离心机，高压灭菌锅，恒温摇床，紫外灯， 存放于无菌培养皿中。 tube)，吸头(tip)，三5)将薯片按一定量加入重悬浮的培养基中， 加样器(pipettor)，50ml离心管(eppendorf 2014 62cFl(5)MAY 万方数据 ACADEMICFORUM I学术论坛画 振荡培养8分钟后取出。 9)提高抗生素浓度进行筛选。 6)倒掉菌液、将侵染后的薯片倒在无菌滤纸上，吸取多余菌 按上述侵染实验步骤进行这一实验，将侵染时间设置为 液，后将薯片以15片／皿的量置于共培养培养皿中