东亚飞蝗血蓝蛋白亚基1基因的原核表达与蛋白结构预测.pdfVIP

2013年 河北大学学报(自然科学版) 2O13 第 33卷 第 6期 JournalofHebeiUniversity(NaturalScienceEdition) Vo1．33NO．6 DOI：10．3969／j．issn．1000—1565．2013．06．015 东亚飞蝗血蓝蛋 白亚基 1基因的原核表达 与蛋 白结构预测 张新新，游婷，刘海霞，印红 (河北大学 生命科学学院，河北 保定 071002) 摘 要：为了分析东亚飞蝗血蓝蛋白亚基 1(LmiHc1)基因的原核表达情况，并对其蛋白结构进行预测 ， 采用 PCR方法扩增 LmiHcl目的基 因片段 ，克隆至 pET—DsbA表达载体 中，构建含 目的基 因的表达质粒 pET—DsbA／LmiHcl，将重组体转化为E．coliBL21(DE3)并诱导蛋白表达 ，至此成功构建 了LmiHcl的原 核表达载体．SDS—PAGE电泳结果显示 目的基因得到 了相对分子质量约为 60ku的高表达的融合蛋 白．采 用 SABLE与 Swiss—Model软件分别预测 LmiHcl蛋 白的二级结构和三级结构 ，LmiHcl蛋 白的二级结构为 d螺旋 、折叠、无规则卷曲的混合体；其三级结构含有3个结构域 ：Hemocyanin—N，Hemocyanin—M，Hemo— cyanin C． 关键词 ：东亚飞蝗；血蓝蛋 白亚基 1；原核表达 ；蛋白结构预测 中图分类号：Q786 文献标志码 ：A 文章编号：1000—1565(2013)06—0636—06 Prokaryoticexpression ofthehemoeyanin subunittype1genefrom Locustamigratoriamanilensisandproteinprediction ZHANG Xinxin，YOU Ting，LIU Haixia，YIN Hong (CollegeofLifeSciences，HebeiUniversity，Baoding071002，China) Abstract：Theaim ofthisstudywastoinvestigatetheprokaryoticexpressionofhemocyanin subunit type1genefrom Locustamigratoriamanilensisandpredicttheprotein structure．A recombinantstrain whichcouldexpressantigenofLmiHclwasconstructed．LmiHclgenewasamplifiedbyPCR．TheDNA productsofLmiHclwereinsertedintoaprokaryoticexpressionvectorpET-DsbA ，andthentranslatedin— tOE．colistrainBI21(DE3)．SDS—PAGE electrophoresiswasanalyzed．Theprokaryoticexpressionvector ofLmiHclgenewassuccessfullyconstructed．And theresultofSDS_PAGE electrophoresisshowed that thetargetwasexpressedhighlyandeffectively．Therelativemolecularmassofproductwasapproximately 6Oku．TheLmiHclproteinsecondaryandtertiarystructurewereseparatelypredictedbyusingSABLE and Swiss—Mode1．Secondarystructurewasamixturewithd—helix，p-sheetand