农杆菌介导的耐盐多基因转化紫花苜蓿及分子检测-应用科学学报.pdfVIP

Online system: 农 业 生 物 技 术 学 报 Journal of Agricultural Biotechnology 2017, 25(8): 1255~1264 DOI: 10.3969/j.issn. 1674-7968.2017.08.006 农杆菌介导的耐盐多基因转化紫花苜蓿及分子检测 王静 麻冬梅 许兴* 宁夏大学农学院，银川750021 *通讯作者，xuxingscience@ 126.com 摘 要 盐超敏感(salt overly sensitive, SOS)信号转导途径是一个控制离子平衡的信号通路，可以在细胞 + 水平上排出Na 控制离子平衡，从而提高植物的耐盐性。将多基因植物表达载体pSOS 中包含的SOS1、 SOS2和SOS3、SOS3 类钙结合蛋白8/钙调磷酸酶B 10 (SOS3-like calcium binding protein 8/calcineurin B- like 10, SCaBP8/CBL10) 及抗双丙氨膦(bialaphos resistance, Bar) 基因多个耐盐基因转化苜蓿(Medicago sativa) ，对于增强苜蓿的耐盐性具有重要的现实意义。本研究采用农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)介导 法，以“金皇后”苜蓿的子叶节为外植体进行遗传转化，除草剂草丁膦(glufosinate)最佳筛选浓度确定为 0.6 mg/L ，除菌剂头孢霉素(cefotazime)筛选浓度确定为300 mg/L ，经除草剂筛选共获得了25 株独立来源 的转化植株。经PCR 分子检测，有6 株转基因植株具有PCR 电泳扩增条带，阳性率为24% 。随机将4 株 阳性植株进行Southern 杂交，有3 株出现杂交信号，拷贝数为1~2 个。RT-PCR 检测表明，与预期的条带大 小相符合的Bar基因(463 bp)和SOS1基因(700 bp)在转基因植株中表达。结果表明，多个外源目的基因已 经整合到苜蓿基因组中并且在转录水平上已表达。250 mmol/L NaCl 胁迫处理后，转基因和野生型植株 生长都受到了一定程度上的抑制，但转基因植株的株高均明显高于野生型，P 1和P2 株系叶面积均明显高 于野生型对照，3 个株系的鲜重均明显高于对照，P2 和P4 株系叶绿素含量明显高于野生型对照。说明 SOS 途径多基因的超表达提高了转基因苜蓿的耐盐性。本研究成功获得了转耐盐多基因苜蓿，为选育适 合盐渍化土壤种植的耐盐苜蓿新品种，及苜蓿耐盐鉴定和耐盐机理等研究提供了理论依据。 关键词 盐超敏感信号转导途径(SOS)，苜蓿，遗传转化，基因组，耐盐性 中图分类号 S541.9 文献标识码 A Alfalfa (Medicagosativa) Transformation with Salt-tolerant Muti-Gene Mediated by Agrobacteriumtumefaciens and Molecular Identification WANG Jing MA Dong-Mei XU Xing* School of Agriculture, Ningxia University, Yinchuan 750021, China * Corresponding author, xuxingscience@126.com Abstract The salt overly sensitive (SOS) signal- transduction pathway is a control ion balance signal pathway. This pathway plays a key role in discharge Na + and ion homeostasis on cellular lever and improves plant salt resistance. It has some realistic significance on enhanced salt tolerance in alfalfa (Medicagosativa), which trans