快速鉴别奶牛乳腺炎细菌或真菌的双重犘犆犚方法.pdfVIP

畜牧兽医学报 ， （ ）： １５５４１５６１ 　 犃犮狋犪犞犲狋犲狉犻狀犪狉犻犪犲狋犣狅狅狋犲犮犺狀犻犮犪犛犻狀犻犮犪 快速鉴别奶牛乳腺炎细菌或真菌的双重犘犆犚方法  戈胜强，柴同杰 ，马保臣，李晓霞，蔡玉梅，吕 静，秦 梅，王炳晓 　 　 （山东农业大学动物医学院，泰安 ２７１０１８） 摘 要：综合多种细菌、真菌 模板的提取方法，采用 巯基乙醇裂解细胞壁，利用蜗牛酶和溶菌酶消化细胞 ＤＮＡ  　 β 壁，再利用石英砂机械破壁，能彻底破坏细菌、真菌细胞壁，提取高质量的ＤＮＡ，摸索出一套从奶样中同时提取细 菌、真菌核酸的新方法。建立双重ＰＣＲ方法，同时完成对细菌１６ＳｒＲＮＡ保守区特异性基因片段和真菌１８ＳｒＲＮＡ 保守区特异性基因片段的扩增，快速诊断奶牛乳房炎是细菌感染还是真菌感染或是混合感染。对采自临床型乳腺 炎和隐性乳腺炎病例的共计 个乳样分别用传统细菌学培养法和双重 方法对比鉴定。结果表明，双重 ８４ ＰＣＲ ＰＣＲ 检测乳样细菌的最小浓度为 ２ ／ ，检测乳样真菌的最小浓度为 ３ ／ 。双重 方法对细菌的检 １０ＣＦＵ ｍＬ １０ＣＦＵ ｍＬ ＰＣＲ 测与平板培养检测方法比较差异不显著（ ），对真菌的检测与平板培养检测方法比较具有更高的检出率（ 犘 ０．０５ 犘 ＞ ＜０．０１）。 关键词：奶牛乳腺炎；细菌；真菌；双重 ＰＣＲ 中图分类号： ； 文献标识码： 文章编号： （ ） Ｓ８５８．２３Ｓ８５７．２６ Ａ ０３６６６９６４２００８１１１５５４０８ 　　　　 　　　　 犇犲狏犲犾狅犿犲狀狋犪狀犱犃 犾犻犮犪狋犻狅狀狅犳犇狅狌犫犾犲犘犆犚犕犲狋犺狅犱犳狅狉 狌犻犮犽犇犲狋犲犮狋犻狅狀 狆 狆狆 犙 狅犳犅犪犮狋犲狉犻犪犪狀犱犢犲犪狊狋犳狉狅犿犅狅狏犻狀犲犕犪狊狋犻狋犻狊  ， ， ， ， ＧＥＳｈｅｎｉａｎ ＣＨＡＩＴｏｎｉｅ ＭＡＢａｏｃｈｅｎ ＬＩＸｉａｏｘｉａＣＡＩＹｕｍｅｉ ｇｑ ｇ ｇｊ ， ， ＬＪｉｎ ＱＩＮＭｅｉＷＡＮＧＢｉｎｘｉａｏ ｇ ｇ （ ， ， ， ） 犆狅犾犾犲犲狅 犞犲狋犲狉犻狀犪狉 犕犲犱犻犮犻狀犲 犛犺犪狀犱狅狀 犃 狉犻犮狌