【简明生物教程】课件第五章酶化学.ppt

(3)、底物构象改变学说 （底物形变） 底物分子也受酶作用而变化。 酶中的某些基团或离子可以使底物分子内敏感键中的某些基团的电子云密度增高或降低，产生“电子张力”，使敏感键的一端更加敏感，更易于发生反应。有时甚至使底物分子发生变形。使ES更易于形成。 往往是酶构象发生改变的同时，底物分子也发生形变。 （4）、 酸碱催化 组氨酸的咪唑基非常重要，因为它既是一个很强的亲核基团，又是一个有效的广义酸碱功能基。 （5）微环境效应：促进中间物生成 说明： 它们并不是在所有的酶中同时都一样的起作用，更可能的情况是对不同的酶起主要作用的因素不完全相同。 Enzyme的分离提纯 1、 选材； 2、破碎； 3、抽提； 4、分离及提纯； 5、结晶； 6、保存。 整个过程注意酶蛋白的变性与失活。（温度，pH，金属离子） 5.7 酶的分离纯化和活力测定 5.7.1 分离和纯化 5.7.2 酶活力的测定 酶活力（酶活性）是指酶催化一定化学反应的能力。 测定酶的活力是测定酶促反应的速度（用v表示）。 方法： （1）测量单位时间内底物的消耗量。 （2）测量单位时间内产物的生成量。 反应速度的单位是：浓度/单位时间。 测定产物增加量或产物减少量的方法要根据底物或产物的物理化学性质而定。 研究酶反应速度应以酶促反应的初速度为准，此时各种干扰因素尚未作用，速度保持恒定不变。 绘出反应过程曲线，根据由原点作曲线的切线或根据曲线的直线部分，来计算酶促反应的速度。 酶单位(u) 指酶量大小，用酶的活力单位来度量。 1个酶活力单位，是指在特定条件下，在1分钟内能转化1微摩尔底物的酶量，或是转化底物中1微摩尔的有关基团的酶量。 酶的比活力： 每毫克蛋白所具有的酶活力，一般用单位/毫克蛋白（u/mg蛋白质）来表示。也有时用每克酶制剂或每毫升制剂含有多少个活力单位来表示（u/克或u/毫升）。 酶的转换数kcat 每秒钟每个酶分子转换底物的分子数。kcat=k3；k3是米氏方程中导出部分中的k3，是由ES形成产物的速度常数。 5.8.1 酶的反应速率 在酶浓度，pH、温度等条件固定不变的情况下，研究底物浓度的反应速度的关系。 5.8.2影响酶反应速率的因素 1、底物浓度的影响 ①在[s]较低时，v随着[s]增加而升高，符合一级反应。 ②当底物浓度较高时，底物浓度增加，反应速度也随之升高，但不显著。 ③当底物浓度很大而达到一定限度时，反应速度则达到一极大值。此时虽再增加浓度反应速度也几乎不再改变。此时符合零级反应。 v=k[E0] [E0]代表酶的总浓度。 米氏方程 米氏常数Km为酶促反应速度达到最大反应速率一半时的底物浓度。它的单位是mol/L(摩尔/升)，是酶的特征性常数。 米氏常数的意义 由米氏方程可知，当反应速度v等于最大反应速度V的一半时，即 米氏常数的涵义是反应速度为最大反应速度的一半时的底物浓度。 米氏常数的单位为浓度单位。 不同酶促反应的Km可相差很大。 说明：①米氏常数是酶的特征性物理常数。一个酶在一定条件下，对某一底物有一定的Km值，故通过测定Km的数值，可鉴别酶。 米氏常数的测定 测定一个酶促反应的Km和V的方法很多。最常用的是双倒数的作图法。 若以1/v对1/[s]作图， 即可得图中的直线。 米氏方程的局限性： 对多底物，多产物的酶促反应不适用。 对体内的多酶体系催化的反应过程不适合。 3、pH的影响 酶在某一pH表现最大的活性，此时溶液的pH为最适pH。 酶的最适pH不是固定的常数，其数值受酶的纯度、底物的种类和浓度、缓冲液的种类和浓度等的影响。因此酶的最适pH只在一定条件下才有意义。 pH对酶作用影响的机制很复杂。 1．环境过酸、过碱能使酶本身变性失活。 2．pH改变能影响酶分子活性部位上有关基因的解离。 3．pH能影响底物的解离。 此时若加入合适的供氢体，反应则进一步发生。 同时光谱又发生改变，新的两条吸收带消失，原来的四条又重新出现，这说明中间产物已分解为产物。 5.3.3酶的作用特点 （1）极高的催化效率 例如碳酸酐