第八章吸光光度.pptVIP

吸光光度法的基本原理 光度分析的方法和仪器 显色反应与分析条件的选择 吸光光度法的应用;◆历史背景知识◆;;;;吸光光度法（分光光度法）是基于有色物质对光的选择性吸收作用，利用测试仪器——分光光度计 ; 特点: 灵敏度高：测定下限可达10－5～10－6mol/L,10-4%～10-5% 准确度能够满足微量组分的测定要求： 相对误差2～5％ （1～2％） 操作简便快速 应用广泛;I0;8.1.1 电磁辐射和电磁波谱; c－真空中光速 2108m/s λ－波长，单位：m,cm,mm,?m,nm,? 1?m=10-6m, 1nm=10-9m, 1?=10-10m ν－频率，单位：赫芝（周）Hz 次/秒 n－折射率，真空中为1;微粒性;波粒二象性; 溶液中溶质分子对光的吸收与吸收光谱; 高能辐射区 γ射线 能量最高，来源于核能级跃迁 χ射线 来自内层电子能级的跃迁 光学光谱区 紫外光 来自原子和分子外层电子能级的跃迁 可见光 红外光 来自分子振动和转动能级的跃迁 波谱区 微波 来自分子转动能级及电子自旋能级跃迁 无线电波 来自原子核自旋能级的跃迁;8.1.2 光学分析法及其分类;2．非光谱法：利用物质与电磁辐射的相互作用测定 电磁辐射的反射、折射、干涉、衍射和偏振等基 本性质变化的分析方法 分类：折射法、旋光法、比浊法、χ射线衍射法;8.1.3 光谱法仪器——分光光度计; ;透光率(透射比）T（Transmittance）;K :吸光系数 Absorptivity ;吸光度与光程的关系 A = ?bc ;吸光度与浓度的关系 A = ?bc;吸光度与波长的关系 A = abc;朗伯-比尔定律的适用条件;8.2.2 吸光系数和吸收光谱;2．吸光系数两种表示法： 1）摩尔吸光系数ε： 在一定λ下，C=1mol/L，L=1cm时的吸光度 2）百分含量吸光系数 / 比吸光系数： 在一定λ下，C=1g/100ml，L=1cm时的吸光度 3）两者关系;4．吸光度测量的条件选择：;8.3 光度分析的方法和仪器8.3.1 光度分析的几种方法;2. 光电比色法;3. 吸光光度法和分光光度计;722型分光光度计结构方框图;分光光度计的主要部件;吸收池：(比色皿)用于盛待测及参比溶液。 可见光区：光学玻璃池 紫外区：石英池 检测器：利用光电效应，将光能转换成 电流讯号。 光电池，光电管，光电倍增管 指示器： 低档仪器：刻度显示 中高档仪器：数字显示，自动扫描记录;光源：;氙灯;棱镜：依据不同波长光通过棱镜时折射率不同;检测器;722型分光光度计;722型分光光度计的光学系统;分光光度计的类型; 1. 单光束分光光度计;2. 双光束分光光度计;8.4.1 显色剂与显色反应 ;显色反应的选择 ;8.4.2 显色条件的确定;2. 显色反应酸度（c(M)、 c(R)一定）;25℃;8.4.3 测定中的干扰以及消除方法;2. 物理法—选择适当的测定波长;8.5 吸光光度法的应用;3. 蛋白质测定—溴甲酚绿、考马司亮蓝等 4. 氨基酸测定—茚三酮(紫色化合物) 5. 水质检测: NH4+、NO2-、Mn2+、Fe2+、SO42-、Hg2+---- 6. 药物含量测定—比吸光系数定量；荷移光谱法测定.;8.5.2 多组分的测定;本章小结;实验部分:;Thank you