pH对黄芩苷与牛血清白蛋白相互作用的影响.pdfVIP

第 31卷第 6期 泉州师范学院学报 Vo1．31NO．6 2013年 12月 JournalofQuanzhouNormalUniversity Dec．2013 pH对黄芩苷与牛血清 白蛋白相互作用的影响 高平章 ，曾炜 ，黄金水，吴洪 (泉州师范学院 分子生物与药物化学福建省高校重点实验室，福建 泉州 362000) 摘 要：运用荧光光谱法研究pH对黄芩苷与牛血清 白蛋 白(BSA)相互作用的影响，结果表明：黄芩苷浓 度的增加引起 BSA在 345nm处荧光有规律地猝灭．荧光猝灭光谱及 Stem—Volme方程分析发现，在 pH为 2．5、4．5和 7．4体系 中均为静态猝灭 ，且两者猝灭常数随 pH增加而增加 ；Lineweaver—Burk双倒数方程 汁算 pH 7．4、温度为 290K和 310K下，黄芩苷和 BSA 的结合常数 K 分别为 ：K29。K—1．2894×10 L ·otol 和 K x： 1．0979×10 L ·otol～．由热力学参数确定黄芩苷与 BSA之间的作用力类型为静 电作用力．同步荧 光光谱表 明，黄芩苷使 BSA芳香性氨基酸(Trp，Tyr)残基微环境 的变化． 关键词：pH；荧光光谱 ；牛血清 白蛋 白；黄芩苷 中图分类号：O657．3；R962 文献标识码 ：A 文章编号：1009—8224(2013)06—0009—05 黄芩苷 (Baicalin)是从唇形科植物黄芩干燥根 中提取 的一种黄酮类化合物(化学结构见图1)，具有清热泻火、降 压止咳等功效 ，临床上常用于调节免疫，治疗高血压 、肺热 咳嗽等疾病_1_3]．血清 白蛋 白在血浆 中含量最丰富，其 能结 4 合和运输许多内源性和外源性化合物l4]．研究蛋 白质和药 物在不同的pH值条件下的结合方式，特别是在较低 的pH 值条件下，能更详细 了解药物 的药理作用和它们结构与功 能的关系L5]．当pH诱导引起蛋 白质的构象改变时，药物一蛋 图 1 黄芩苷 的化学结构 白质的相互作用将会更复杂 ，可能会影响它们的亲和力 ，这 Fig．1 ThestructureofBaicalin 将直接影响药物在血液的浓度和持续的有效量嘲，从而影响其生理学效应．本文采用荧光光谱法研究了 黄芩苷在不同pH环境下与牛血清 白蛋 白的相互作用，并结合阐明两者的结合规律 ，就不同酸度条件 下的两者作用机理进行初步分析． 1 材料与方法 1。1 仪器与试剂 CaryEclipse荧光分光光度计 ；BS224S电子分析天平 ；pHS-3C型酸度计 ；HH一2数显恒温水浴锅 ； 全新百得 proline系列移液器；BCD一252K型电冰箱．黄芩苷 (纯度98％，陕西慧科生物有 限公司)；牛 血清 白蛋 白(BSA，武汉贝特生物有限公司)；其他试剂为国产分析纯． 1．2 溶液配制 (1)Tris—HC1缓冲溶液 (O．5otol·L )．称取 Tris60．55g，加入 2．92gNaC1，用去离子水溶解后定 容至 1000mL，用酸度计调节 pH至7．4；同法制得 pH4．5和 pH2．5的Tris—HC1缓冲溶液． (2)黄芩苷溶液 (1．25×lO otol·L )．称取黄芩苷 o．0557g，用无水乙醇溶解后定容至 100mL， 4℃保存． 收稿 日期 ：2013-08—09 作者简介 ：高平章(198O～)，男，河北广平人 ，讲师，博士生 ，从事天然产物的药理学研究． 基金项 目：福建省教育厅科技项 目(JA13266)；泉州市科技局重点科技项 目(2011Z024) 10 泉州师范学院学报 2013年 12月 (3)牛血清 白蛋 白溶液 (5．0×10 mol·L )．称取 BSAO．0034g，用Tris—HC1缓冲溶液溶解后定 容至 100mL，4℃保存． 1．3 实验方法 1．3。1 黄芩苷对 BSA的荧光猝灭测定 在石英 比色皿中，用移液枪依次加入 2mL的BSA(5．0×10 otol·L )，