番木瓜叶片总RNA提取方法比较研究.pdfVIP

北方 园艺2010(18)：133～135 ·生物技术 · 番 木 瓜 叶片 总 RNA 提 取 方 法 比较 研 究 陈 萍，姜 成 东，卢 业 凌 (海南大学 热带作物种质资源保护与开发利用教育部重点实验室，海南大学 园艺园林学院 ，海南 儋州 571737) 摘 要 ：采用 了CTAB法和 GHCL法及 SDS法 3种方法分别对番木瓜 的叶片进行 RNA 的 提取。该试验采用SDS法、GHCI法提取番木瓜总RNA，并对提取的RNA进行质量比较。结果 表明：GHCI法(方法2)提取的RNA产率高，无明显降解，OI)2。／()D2舳比值较好，是有效提取总 RNA 的方法 。 关键词：番木瓜；RNA；提取方法 中图分类号：S662．2 文献标识码：A 文章编号：1001--0009(2010)18一O133—03 番木瓜 (CaricaPapaya)原产热带美洲及非洲，是番 1．4mmol／LNaC1，2 CTAB，5 PVP，巯基 乙醇]； 木瓜科番木瓜属植物，通常不分枝 ，具乳汁，番木瓜 味 l×CTAB提取液提取缓冲液[5ommol／ITris—HC1(pH 甘、性平、无毒 ，番木瓜果实内的维生素A和VC的含 8．O)，10mmol／IEDTA，1 CTAB，20mmol／L，巯基 量比较丰富 ]，另外还含有木瓜蛋白酶l3，具有较高的食 乙醇]]IGHCIx-tractionbuffer[5M Guanidiumhydro— 用 、加工、医学、观赏价值。番木瓜病毒病是番木瓜生产 chloride，100mM 1r、is—HClpH 8．0，100mM NaAcpH 和发展的主要限制因素 j，对番木瓜叶片总RNA进行 5．5，100mM，乙醇，现用现加]；TRIreagentbuffer(100 快速、高效提取是番木瓜病毒病分子探针检测技术成功 mM Tris—HClpH 8．0，150mM NaCl，1 SDS，2．5mM 的关键，也是相关基因组学、蛋白质学研究开展的前提。 EDTA)11。TE缓冲液 ：10mmol／LTris—HC1(pH 8．0)， 该试验通过对 3种不同方法提取的番木瓜叶片总 1mmol／IEDTA(pH8．0)]，高压灭菌备用 J。ⅢSOS RNA的效果进行较全面的比较 ，以寻求适合于提取高 提取液：提取缓冲液(50mmol／LTris—HC1cp-pH8．0，1． 质量番木瓜叶片总RNA 的有效方法 ，进而为以后的番 0mmol／LEDTApH 8．0，140mmol／INaC1，10％oSDS， 木瓜相关的分子生物研究打下 良好基础。 8 PVP，5 的 巯基乙醇(现加现用)。 1 材料与方法 1．1．2 试验仪器 H-8数显恒温水浴锅、UNIVERSAL- 1．1 试验材料 32R高速冷冻离心机、HVE-50全 自动高压灭菌器、Uv_ 供试材料为番木瓜叶片(采 白海南大学儋州校区园 1601PC紫外可见分光光度计、GAS7401X凝胶成像系 艺园林学院果园)。提取试验开始前 ，分别剪取番木瓜 统、DYY-m一4型稳压稳流电泳仪、液氮罐、电子天平、手 的不重于0．1g的叶片各 3份，分别放置于高温烘过的 持微量移液器、研钵、烧杯、--70℃～4。C冰箱等。 干净研钵中。 1．2 试验方法 1．1．1 试验试剂 采用巯基乙醇 、氯仿、异戊醇、无水乙 1．2．1 方法 1(CTAB提取法)提取步骤 (根据牛建新_6 醇、75 和 95 无水 乙醇 3M NaAc、10mmol／LTris— 方法，有