蔗糖利用型毕赤酵母工程菌的构建 construction of an engineering pichia pastoris strain that utilizes sucrose.pdfVIP

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2017-11-22 发布于上海
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蔗糖利用型毕赤酵母工程菌的构建 construction of an engineering pichia pastoris strain that utilizes sucrose.pdf

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蔗糖利用型毕赤酵母工程菌的构建 construction of an engineering pichia pastoris strain that utilizes sucrose

甘蔗糖业 2012年第 3期，2012年 6月 SugarcaneandCanesugar,No．3，Jun．2012 蔗糖利用型毕赤酵母工程菌的构建黄曾慰，蚁细苗，曾练强，李雨虹，张远平，梁达奉 (广州甘蔗糖业研究所广东省甘蔗改良与生物炼制重点实验室，广东广州 510316) 摘要：巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)表达系统是近20年来应用最广泛的真核表达系统之一，已有 500多种蛋白在该系统得到了成功表达，然而在毕赤酵母基因组中却缺少蔗糖酶基因，因此无法利用蔗糖。本研究从酿酒酵母基因组中克隆得到蔗糖酶基因 SUC2。将 SUC2亚克隆后得到表达载体 pPICZaA—SUC2。经电转化后，表达载体整合进入毕赤酵母KM71H基因组，得到能够利用蔗糖的毕赤酵母工程菌。关键词：毕赤酵母；蔗糖；蔗糖酶；SC2 中图分类号：TS241 文献标识码：A 文章编号：1005—9695(2012)03—0053—03 ConstructionofanEngineeringPichiapastorisStrainthatUtilizesSucrose HUANG Zeng-wei，YIXi—miao，ZENG Lian—qiang，LIYu—hong，ZHANG Yuan—ping，LIAND Da-feng (GuangzhouSugarcaneIndustryResearchInstituteG／uangdongKeyLabofSugarcaneImprovementBiorefinery， Guangzhou510316) Abstract：Pichiapastorisisoneofthemostrfequentlyusedexpressionsystemsduringthelasttwodecades，and morethan500differentkindsofproteinshavebeensuccessfully expressed．ButPichiI71pastorisisunableto utilizesucrosebecauseitslackofinvertasegene．Inthisstudy,thegeneSUc2encodinginvertasewascloned rfom Saccharomycescerevisiaechromosome．SUC2wasthensubclonedintothevectorpPICZaA toconstruct therecombinantpPICZaA—S【C2．TherecombinantplasmidwasthentransformedintoPichiapastorisKM 71H toconsturcttheengineeringstrainutilizingsucrose． Keywords：Pichiapastoris；Sucrose；Invertase；SUC2 0前言蔗糖酶 (invertase)既能催化蔗糖水解生成葡萄糖和巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)表达系统是果糖，也能催化棉子糖水解生成密二糖和果糖，是近 2O年来应用最广泛的真核表达系统之一，已有酿酒酵母蔗糖代谢途径中的第一个关键酶。酿酒酵 500多种来自细菌、真菌、病毒、动植物和人的蛋母基因组中编码蔗糖酶的 SUC2基因，能够转录形白在该系统得到了成功表达之J。毕赤酵母能够高效成 1．9kb和 1．8kb2种 mRNA，前者的翻译产物被糖表达外源蛋白，对外源蛋白具有翻译后修饰功能；基化并且分泌至胞外，而后者的翻译产物则留在胞宿主本身背景蛋白少，还可通过合适的信号肽，使质中，成为胞内酶 J。产物能够顺利分泌至胞外，易于纯化分离；外源基本实验克隆了蔗糖酶基因 SUC2。将蔗糖酶基因可整合进入酵母基因组被稳定地遗传。然而在毕