混合溶剂体系中脂肪酶催化葡甘聚糖的转酯化反应.pdfVIP

混合溶剂体系中脂肪酶催化葡甘聚糖的转酯化反应 1 1 2 廖启金 李光吉 * 宗敏华 1 2 华南理工大学， 材料科学与工程学院， 生物科学与工程学院，广州 510640 E-mail: gjli@scut.edu.cn 关键词：混合溶剂 葡甘聚糖 转酯化 生物催化 乙酸乙烯酯 葡甘聚糖（Konjac Glucomannan ，简称KGM ）是一种从我国和东南亚国家特 有的植物魔芋中提取出来的高分子杂多糖[1] ，来源十分丰富，在魔芋中的含量可高 [2] 达60～80 ％ 。理论上，构成KGM 的单体单元——葡萄糖和甘露糖上的羟基都能 够参与多种反应如酯化反应、醚化反应等，得到的KGM 衍生物具有许多新的功能， 从而能大大地开拓KGM 的应用领域。 在我们的前期工作中，探讨了单一有机溶剂中酶催化KGM 的转酯化反应，所 得酯化KGM 的取代度DS 能达到0.65。研究表明，既具有较高的疏水性，又能使 KGM 溶解或溶胀的溶剂有利于该反应的进行。然而，单一的有机溶剂难以满足这 一要求，故尝试在混合溶剂体系中实施这一反应，以提高该反应的反应程度。 本研究探讨了混合溶剂对固定化脂肪酶Novozym 435 催化葡甘聚糖转酯化反 应的影响。对 3 种助溶剂甲苯、氯仿和二甲基乙酰胺（DMAC ）以及8 种主溶剂 异辛烷、正己烷、环己烷、四氯化碳、二苯醚、苯、DMAC 与乙酸乙烯酯进行了 初步筛选，并进一步考察了助溶剂含量的影响，以期通过生物催化法制备出较高 酯化度（DS ）的KGM 酯化衍生物，为深入研究非水相中生物催化KGM 转酯化反 应奠定实验及理论基础。 表1列出了在用异辛烷作主溶剂的混合溶剂体系中，酶催化反应产物的DS测试 结果。这一实验结果表明：在该混合溶剂体系中，助溶剂甲苯、氯仿均能明显提 高反应酯化效果，DS均在0.67 以上。在此基础上，探讨了在用甲苯作助溶剂的混 合溶剂体系中，不同的主溶剂对酶催化反应的反应程度的影响，结果如表2所示。 其中，异辛烷和环己烷作主溶剂时反应产物的DS较高,最大可达到0.92。考虑到溶 剂的可获得性和经济性等因素的影响，故最终选定异辛烷为最佳的主溶剂。 进一步地，研究了以异辛烷作主溶剂、甲苯和氯仿分别作助溶剂时助溶剂含 量对酶催化酯化反应程度的影响。从图 1 和图 2 中可看出，当助溶剂甲苯或氯仿 体积分数由低到高增加时，取代度DS 先呈上升趋势，到达一定值后又逐渐降低。 导致这一现象的原因是，非水相酶催化反应要顺利进行，所用反应介质一般必须 满足 2 个条件[3] ：(1)具有较高的疏水性(logP 值)；(2)易于溶解或溶胀底物。然 而LogP 值较高的有机溶剂(如异辛烷)却比较难溶解底物；另一方面，一些疏水性 较弱的溶剂，如甲苯、氯仿等，虽能溶解或溶胀底物，但酶在其中的活性却很低。 若选用混合溶剂体系则能很好的解决这一问题。故在反应体系中，由于助溶剂的 加入能够更好的溶解或溶胀底物，使得取代度DS 有增加的趋势。当助溶剂的含量 超过一定值以后，可能会过分影响酶的活性而使酶失效，抵消了对底物的增溶作 用，反而使酶反应活性下降，产物的DS 降低。当甲苯含量为3 ％，氯仿含量为4 ％时，酶促KGM 转酯化反应的反应程度分别达到最大。 此外，比较表1 和图1，我们可以发现在异辛烷－甲苯混合溶剂中，实验结果 有所差异。这是由于表1 和图1 所用的底物是不同批次的酶催化降解的KGM ，其 分子量及其分布有所不同的缘故。 Table 1 The effect of cosolvents on the enzymatic transesterification of KGM using isoctane as a solvent. Composition of reaction system Sample Reaction Medium (Total Vol. 20 ml)