λ噬菌体概论.doc

λ噬菌体裂解途径和 溶原化途径的选择和调控 目录 摘要 λ噬菌体的发现历史 二、λ噬菌体分子生物学概述 （1）基本概念 （2）λ噬菌体基因组的结构（3）λ噬菌体的复制 三、λ噬菌体载体的构建及其主要类型（1）构建噬菌体载体的基本原理（2）λ噬菌体载体的主要类型四、λ重组体DNA分子的体外包装（1）λ重组体DNA分子的转染作用（2）λDNA的体外包装（3）λ噬菌体DNA的包装限制问题噬菌体生活周期 （1）噬菌体生长的测定 （2）毒性噬菌体 溶原性噬菌体和性λ噬菌体　两种途径共同的早期基因表达途径 裂解途径的建立及基因调控 裂解途径的建立 基因调控 ）反终止作用 溶原化途径的维持 （1）CI蛋白功能 （2）CI蛋白的结构 （3）阻遏物与DNA的结合及调控机制 十、溶原化和裂解周期的平衡 总结 参考文献 λ噬菌体的裂解途径和溶原化途径的选择和调控 摘要: 大约40年前，巴黎巴斯德研究所的AndRE Lwoff和他的同事发现，当用中等剂量的紫外线照射一株普通大肠杆菌时，细菌停止生长，大约90min后，这些细菌裂解，大量被称为λ的病毒被释放到培养基中。释放的λ噬菌体通过感染新细菌扩增。许多被感染的细菌不久裂解，产生新的噬菌体，但是有些细菌存活下来并且携带潜伏状态的λ噬菌体。这些细菌正常的生长和分裂，直到培养物又一次被照射，然后这些子代细菌像起始的细菌一样，裂解并产生大量新的λ噬菌体。 AndRE Lwoff和他的同事意识到病毒两种状态的转变——裂解状态和溶原化状态，这昭示了一个基本的生物过程：基因的打开和关闭即基因调控。本文旨在以λ噬菌体为例，简介λ噬菌体并从分子水平上阐明裂解途径和化途径的基因调控机制。 关键词: λ噬菌体 基因调控 裂解途径化途径 一、λ噬菌体的发现历史 1951年J. Lederberg的妻子Esther Lederberg证明了J. Lederberg和Tatum用来杂交的K12中有原噬菌体，并命名为λ，经10年的研究搞清了溶原化的实质。 在E.coli K12中是有原噬菌体的存在。Jacob和Wollman（1956年）发现了合子诱导（zygotic induction）现象，并利用合子诱导确定了几个E.coli染色体上原噬菌体的整合位点。他们发现Hfr（λ）×F－所得到的重组子频率要比Hfr×F－（λ）或Hfr（λ）×F－（λ）要低得多。这是由于在Hfr（λ）×F－的杂交中，原噬菌体进入无阻遏物的受体细胞质中，进行大量复制使受体细胞裂解，因此不易得到重组子，此现象就称为合子诱导。现在我们再回过头来查阅一下传递等级作图，中断杂交实验以及重组作图都是采用Hfr×F－（λ）就是不致产生合子诱导的缘故。 二、λ噬菌体分子生物学概述 基本概念 λ噬菌体的调控有多种形式，有正调节、负调节、自主性的反馈调节、抗终止调节、反义调节及反向调节等。其机制之精巧，过程之复杂，形式之多样堪为集原核生物调控之大成。 CI蛋白是λ噬菌体的阻遏蛋白，由两个亚基组成，每个亚基都有两个功能区，N端与操纵基因结合，C端具有相互结合成二聚体的能力。CI蛋白的二聚体与二聚体之间有协同效应。 Cro蛋白也是一种阻遏蛋白，以二聚体的形式与操纵基因结合，但Cro最易和OR3结合，而CI最容易与OR1，OR2结合，Cro无协同效应。 CⅡ蛋白能激活cI的建立溶原化启动子PRE，整合酶启动子PI以及反终止蛋白Q的反义RNA动子PAQ，这些启动子的激活却对溶原化有利。 λ噬菌体也具有反义的mRNA调节的机制。一是PRE启动子其转录方向与cro基因的转录方向相反，其5′端和cro基因的mRNA重叠，可