葡聚糖抗体的制备及其elisa检测方法的建立 preparation of dextran antibody and establishment of its elisa immunoassay.pdfVIP

葡聚糖抗体的制备及其Elisa检测方法的建立 谢珍茗， 方丽莎， 孙明， 余林 (广东工业大学轻1l化工学院，广东广卅l510003) 摘要：制备并筛选葡聚糖拟糖蛋白抗原，通过动物免疫获得葡聚糖多克隆抗体并建立葡聚糖的 Elisa检测方法．应用于实际样品检测。以还原胺化法制备大分子葡聚糖一牛血清蛋白(BSA)拟糖 蛋白质．通过SDS—PAGE与自由氨基测定，优化葡聚糖拟糖蛋白抗原制备反应，建立直接竞争 Elisa筛选抗原活性。以制得的葡聚糖T40一BSA拟糖蛋白抗原为免疫原，经过免疫白兔后获得高 效价多抗：建立检测葡聚糖多抗的间接非竞争Elisa方法。确定拟糖蛋白抗原的最佳制备条件(n (葡聚糖)航(氧化剂NalO。)=1／120，偶联时间24h)；筛选获得不同制备条件下与标准抗体结合最 强的抗原产物T40一BSA。动物免疫获得多抗，优化实验条件：以质量浓度10 pLg／mL的T40一BSA 为包被抗原．37℃时血清多抗和酶标多抗的反应时间均为45min，质量分数5％小牛血清为封闭 液后洗板：建立了基于T40一BSA拟糖蛋白抗原的不同相对分子质量葡聚糖间接竞争Elisa检测 方法，并应用于对市售白糖中葡聚糖T40的含量检测。研究结果表明，葡聚糖一BSA拟糖蛋白抗 原制备条件不同。对其免疫活性有影响。建立的检测方法有良好的线性，能用于实际样品中葡聚 糖含量的检测。 关键词：葡聚糖；拟糖蛋白抗原；制备；抗体；酶联免疫分析 539文献标志码：A 中图分类号：Q 文章编号：1673一1689(2013)12—1319—08 ofDextran andEstablishmentofIt7SElisa PreparationAntibody X／E Li-sha，SUN Zhen-ming，FANGM汛g，YULinj of andChemical of 51 (FacultyLight Engineering，GuangdongUniversityTechnology，Guangzhou0003，China) this Abstract：In were evaluatedand study，dextranneoglycoproteinantigensprepared finally obtaineddextran an immunosorbent antibodies，and polyclonal enzyme-linked methodwas toElisa methodwas tousefor developedaccordingtheory．The put quantitativeanalysis ofdextranin were Reductive practicalsamples．Dextranneoglycoproteinantigenspreparedby Amination wereconfirmed method，and by