修饰剂对青霉菌葡萄糖氧化酶的效应研究.pdfVIP

第 49卷 第 5期 厦 门大学学报 (自然科学版) Vo1．49 No．5 2010年 9月 JournalofXiamenUniversity(NaturalScience) Sep．2010 修饰剂对青霉菌葡萄糖氧化酶的效应研究 张 茜 ，闫 冰 ，王 勤 ，刘长勤。，石 艳 ，陈清西 ¨ (1．厦门大学 生命科学学院，滨海湿地生态系统教育部重点实验室，福建 厦门 361005； 2．厦 门大学附属第一医院，福建 厦 门361004) 摘要：研究了几种修饰剂对青霉菌(Penicilliumamagasakiense)葡萄糖氧化酶(GOD，EC1．1．3．4)活力的影响．结果表 明，溴代 乙酸、N一溴代丁二酰亚胺(NBS)、乙酰丙酮等对酶的抑制作用较强，随着抑制剂浓度增大，酶活力呈指数下降，酶 活力下降5O％的抑制浓度分别为 4O．8，28．5和 8．7mmol／L，认为咪唑基、吲哚基、精氨酸胍基是该酶的活性功能基 团， 而蛋 白质分子中巯基、二硫键 、赖氨酸 的c-氨基、丝氨酸残基与酶活力无关．进一步研究了 NBS的抑制动力学，结果显 示：NBS对酶的抑制作用为非竞争性可逆抑制，抑制常数(Kj)为 19．2~／mol／L．该研究对青霉菌GOD在生产上的应用具 有一定 的理论指导意义． 关键词：葡萄糖氧化酶；青霉菌；修饰剂；抑制 中图分类号 ：TQ925．4 文献标识码：A 文章编号2010)05—0707—04 葡萄糖氧化酶 (Glucoseoxidase，GOD)系统名为 ： 酐 、乙酰丙酮 、苯甲基磺酰氟 (PMSF)对本实验提取纯 D一葡萄糖氧化还原酶 (EC 1．1．3．4)．它能够在有氧 化的尼崎青霉菌 GOD进行特异性修饰，检测其对该 气的条件下专一性催化 D一葡萄糖生成葡萄糖酸和 酶活性的影响，以此判断不 同氨基酸残基与酶活性 中 过氧化氢[1]．它广泛地分布于动物、植物和微生物体 心的关系 ，为该酶的应用开发提供理论基础． 内，但由于微生物具有生长繁殖速度快 ，来源广等特点 使之成为 GOD的主要来源 ，工业上主要利用黑曲霉 1 材料与方法 和青霉菌 (Penicilliumamagasakiense)株进行发酵生 产．GOD由于其天然无毒 、无副作用 ，自2O世纪被发 1．1 实验材料 现以来 ，已广泛应用于食品医药、临床化学、分析化学 青霉菌 (ATCC28686)购 自中国工业微生物菌种 等许多领域，具有去除葡萄糖、脱氧、杀菌等作用 ]． 保藏管理 中心；GOD是由本实验室从青霉菌种制备而 在文献E5-1获得尼崎青霉菌 GOD 电泳单一纯的 获得的电泳纯酶制剂 ；葡萄糖为上海生化试剂厂产品； 基础上 ，本文采用特定的化学修饰剂对青霉菌 GOD 辣根过氧化物酶为厦门普京生物技术有限公司产品； 进行化学修饰作用 的研究．化学修饰剂在基础酶学研 4一氨基安替吡啉为 BioBasicInc产 品；其余化学试剂 究上常用于以下几个方面：1)探测酶活性必需氨基酸 均为国产分析纯；其他生化试剂均为 国药集 团化学试 的性质和数 目；2)用于酶纯度 的分析与检测；3)用于酶 剂有限公司产品． 蛋 白一级结构的测定 ；4)探测酶蛋 白的结构变化与运 动 ；5)探测酶蛋 白的结构变化与运动 ；6)测定酶蛋白部