CO-IP说明书（非常不错）.docVIP

说明书（CO-IP26149） Pierce免疫共沉淀（Co-IP）试剂盒 26149 2181.6 描述26149 Pierce 免疫共沉淀（Co-IP）试剂盒， 包含足够进行 50 次免疫沉淀反应的试剂（每次使用 25ul 树脂固相化抗体） 试剂盒组分： 加强型AminoLink偶联树脂，2 mL 固相树脂以50%的浆液形式提供（例如，100ul 50%的浆液含有50ul固相树脂） 20×交联缓冲液，25mL，使用时稀释至：0.01M Na ，0.15MNaCl；pH 7.2 氰基硼氢化钠溶液（5 M），0.5 mL 淬灭缓冲液，50 mL ，1M Tris-HCl 洗涤缓冲液，60 mL，1M NaCl IP 裂解/洗涤缓冲液，2 50mL，0.025MTris，0.15M NaCl，0.001M EDTA，1% NP-40， 5%甘油；pH 7.4 改良型杜氏PBS （20×），25mL，使用时稀释至：0.008M Na 、0.14MNaCl、0.01M KCl；pH7 100×条件缓冲液，5mL，中性pH 缓冲液 洗脱缓冲液，50 mL，pH 2.8，含有伯胺 非还原型泳道标记上样缓冲液，（5×），5 mL，0.3M Tris?HCl，5% SDS，50%甘油，泳道标记示踪染料；pH 6.8 Pierce 离心柱-带螺帽，100 个柱子，包含相应配件 微量离心收集管，2 mL，100个 微量离心样品管，1.5mL，50个 Pierce对照用琼脂糖树脂（4％琼脂糖珠交联），2 mL 固相树脂以50%的浆液形式提供（例如，100ul50%的浆液含有50ul的固相树脂） 干燥保存。常温运输。 产品简介 Thermo Scientific Pierce免疫共沉淀（Co-IP）试剂盒通过将纯化的抗体直接固定在琼脂糖基质上， 从细胞裂解液或其它复杂混合物中分离天然蛋白复合体。免疫共沉淀是研究蛋白:蛋白相互作用的一 种常用方法，即用抗体去免疫沉淀特定抗原（诱饵蛋白）并且共沉淀任何与该抗原相互作用的蛋白（目 标蛋白）。传统的免疫共沉淀使用蛋白A或蛋白G来固定抗体，因此最终洗脱液中会含有抗体的重链和 轻链，二者迁移形成的条带可能和目标蛋白的条带重合从而掩盖重要的实验结果。Pierce免疫共沉淀 试剂盒通过共价偶联抗体至胺基活化树脂,从而解决这一问题。试剂盒包含了用于优化蛋白结合和回 收的缓冲液、用于对照实验的试剂、以及高效的离心柱系统，进一步地简化了实验操作，缩短了实验时间。 重要产品信息 ?树脂的所有离心步骤需在低速（如1000-3000g ）、30-60 秒条件下操作。离心速度大于 5000g 可能会导致树脂聚集和再悬浮困难。 ?离心柱离心时，使用2ml 收集管则流过的液体体积应不超过600 μL，使用1.5 ml 的收集管时则 应不超过300 μL。体积超出可能会导致柱子内产生回压及洗涤和洗脱不完全。 ?抗体溶液中的伯胺（如，Tris，甘氨酸），会竞争性的结合树脂上的位点。在交联反应之前，使 用Thermo Scientific Zaba 脱盐离心柱或Slide-A-Lyzer 透析卡去除伯胺。 ?明胶或抗体溶液中的载体蛋白会竞争性的结合树脂上的位点。用ThermoScientific Pierce 抗体纯 化试剂盒（货号：44600）去除明胶和载体蛋白，或者使用蛋白A 进行纯化（货号：20423） 及透析。 ?用对照琼脂糖树脂预洗细胞裂解液或向改良型杜氏PBS 中加入 0.1-1% Surfact-AmpsX-100 (10% Triton X-100, 产品编号：28314)，去除免疫沉淀沉淀过程中非特异性结合的蛋白。 注意: Surfact-Amps X-100 没有随试剂盒提供。 ?IP裂解/洗涤缓冲液已进行过代表性细胞类型的检测，包括但不限于下列细胞系： HeLa， JURKAT， A431，A549，MOPC，NIH 3T3 和U2OS。通常情况下，10 的HeLa细胞可以产生约10mg 胞团块，按照~3μg/μL的配比使用 IP 裂解/洗涤缓冲液（即 100μL IP 裂解/洗涤缓冲液可以裂解 ~300μg 细胞团块 ?为了获得最佳结果，可添加ThermoScientific Halt 蛋白酶（货号：78429 ）和磷酸酶（货号：78420 ） ?IP裂解/洗涤缓冲液可兼容Thermo Scientific Pierce BCA 蛋白定量分析试剂盒（货号：23225）。 ?设置合理的对照对于鉴定相关的相互作用至关重要。试剂盒提供的Pierce对照用琼脂糖树脂是用 作Pierce 蛋白A ?Pierce离心柱包含有离心柱，螺旋盖，底盖，带有 Luer-Lok接头的螺旋帽，大的垫片和一