试验一植物组织渗透势的测定质壁分离法原理成长的植物细胞.DOCVIP

实验一 植物组织渗透势的测定（质壁分离法） 一、原 理 成长的植物细胞是一个渗透系统，当把细胞置于一定浓度溶液中时，当植物组织细胞内的汁液与其周围的某种溶液处于渗透平衡状态，且此时植物细胞内的压力势为零时，那么细胞汁液的渗透势就等于该溶液的渗透势。该溶液的浓度称之为等渗浓度。 当用一系列梯度浓度溶液观察细胞质壁分离现象时，细胞的等渗透浓度将界于刚刚引起初始质壁分离的浓度和与其相邻的尚不能引起质壁分离的浓度梯级之间的溶液浓度。代入公式即可计算出其渗透势 二、仪 器 药 品 显微镜 载玻片及盖玻片 镊子 刀片 培养皿8套 滤纸 1M蔗糖溶液 滴管 三、实 验 步 聚 1．梯度浓度溶液的配制：用1M蔗糖溶液为母液，分别吸取8，7，6，5，4，3，2ml溶液于试管中，各加入蒸馏水至10ml，即成0.8，0.7，0.6，0.5，0.4，0.3，0.2M的梯度溶液。 用移液管，从0.2M依次取一定量的溶液（3ml），盛于培养皿内，盖上盖，贴上标签待用。 2．将带有色素的植物组织（叶片），一般选用有色素的洋葱鳞片的外表皮，紫鸭跖草，苔藓，红甘蓝及黑藻，丝状藻等水生植物，也可用乔豆，玉米、小麦等作物叶的表皮。用镊子撕取下表皮，迅速分别投入各种浓度的蔗糖溶液中，使其完全浸入， 3．5—10分钟后，从0.5M开始依次取出表皮薄片放在滴有同样溶液的载玻片上，盖上盖玻片，于显微镜下观察是否所有细胞都产生质壁分离的现象，实验中必须确定一个引起半数以上细胞原生质刚刚从细胞壁的角隅上分离的浓度，和不引起质壁分离的最高浓度。取二者的平均值为等渗透势。 4．按照公式把等渗浓度换算成渗透势，以MPa表示之。 ψπ=－RTiC ψπ表示欲测渗透势，MPa； R表示气体常数：0.008314( MPa ·L/M·K)； T表示绝对温度，即(273+t℃) K； i 表示解离系数，蔗糖等于1。 C表示等渗溶液的浓度，则： ψπ=－0.008314×(273+ t℃)×1×C 蔗糖克分子浓度（M） 渗透势（巴） 质壁分离的相对程度（作图表示） 0.5 0.45 0.40 0.35 0.30 0.25 0.20 0.15 0.10 测出引起质壁分离刚开始的蔗糖溶液浓度和与其相邻的不引起质壁分离最高浓度之后，可按下列公式计算在常压下该组织细胞质液的渗透势。 【思考题】 质壁分离法除了用于细胞渗透势测定外，还有什么用处？ 实验二 植物组织水势的测定（小液流法） 一、原 理 水势表示水分的化学势，象电流之由高电位处流向低电位处一样，水从水势高处流向低处（代表水的能量水平）。植物体组织之间，细胞之间以及植物体及环境间的水分移动方向都由水势差决定。 当植物细胞或组织放在溶液中时，如果植物的水势小于溶液的渗透势（溶质势），则组织吸水而使溶液浓度变大；反之，则植物细胞内水分外流而使溶液浓度变小；若植物组织的水势与溶液的渗透势相等，则二者水分保持动态平衡，外部溶液浓度不变，此溶液的渗透势即等于所测植物的水势。可以利用溶液的浓度不同其比重也不同的原理来测定试验前后溶液浓度的变化。然后根据公式 计算其渗透势。 二、仪 器 药 品 试管 毛细吸管（尖端弯成900） 移液管 剪刀 镊子 次甲基蓝 三、实 验 步 骤 1．首先配制一系列浓度递增的蔗糖溶液（0.1,0.2,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7,0.8M）各10ml，注入试管中，各管都加上塞子，并编号。按编号顺序排成一列，放在试管架上，作为对照组。 2．另取8支试管，编好号，按顺序放在试管架上，作为试验组。然后由对照组中之各试管中分别取溶液4ml移入相同编号的试验组试管中，再将各试管都加上塞子。 3．用剪刀将菠菜叶剪成大小相等的小块，约40—50片。向试验组的每一试管中各加相等数目的叶片小块，塞好塞子，放置30分钟，在这段时间内摇动数次，到时间后，向每一试管中各加次甲基蓝粉末少许，并振荡，使溶液着色均匀。 4．用毛细吸管从试验组的各试管中依次吸取着色的液体少许，然后伸入对照组的相同编号试管的液体的中部，缓慢放出一滴蓝色试验溶液，并观察小液流移动的方向，并记录之。 观察液滴移动的方向： 溶液浓度(M) 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 液滴方向