培养条件对云芝菌丝体生长与多醣生成之影响.docVIP

培養條件對雲芝菌絲體生長與多醣生成之影響 指導教授 楊芳鏘博士 研究生 林嘉隆 摘 要 本研究主要目的在利用液態培養方式，藉由改變在不同的培養條件下雲芝(Coriolus versicolor BCRC 35253)菌絲體生長、多醣體生成及形態變化之影響，希望藉由控制培養因子來提高菌絲濃度與多醣體的產量。三角瓶培養實驗，主要探討培養基的成分、時間、pH值、不同高分子添加等環境因子對菌絲生長與多醣生成之影響。 結果顯示：雲芝在搖甁實驗的培養基中培養第七天時，菌絲濃度可達到11.63 (g/L)，且多醣體的產量高達2.1 (g/L)。添加不同高分子對菌絲濃度與形態有明顯的差異，在低接種量下實驗，添加agar (0.2 %)菌絲濃度可達到16.23 (g/L)，菌絲粒徑大小約4 mm。此外，發酵槽操作方面，在5 L的攪拌式發酵槽中，轉速500 rpm、 pH值6.0及25 ℃下菌絲能在短時間內達到高濃度，反之在轉速100 rpm下菌絲濃度低，而多醣體濃度較高。 關鍵字：雲芝、高分子添加、多醣生成、形態 前言自古以來，食藥用菇雖然廣為用於民間流傳的藥方中，但許多藥效成分至今尚未闡明，其應用方面在中國已有二千多年的歷史，靈芝、雲芝、樟芝、茯苓、豬苓及冬蟲夏草等藥用菇就有明確的藥效記載(王等，1998)。 近年來研究發現無論是子實體或菌絲體發酵液，均含有相當多量的生物活性成分，或二次代謝物質，這些成分包括生物體防禦物質(如抗生素、抗腫瘤、抗病毒物質等)，及生體機能調節物質(如降血壓、降血糖、降血脂、抗血栓、抗癌症等活性物質)(黃，2000)。目前多種菇類的多醣或多醣蛋白已經步入臨床應用階段，當作一種免疫增強劑，以多孔菌科菇類及食用菇類子實體用熱水提取的萃取物，對Sarcoma 180等動物移植癌有明顯寄主仲介性的抗腫瘤活性(賴，1997)。經過多年研究結果，目前以開發出雲芝多醣(Krestin)、香菇多醣(Lentinan)和裂褶菌多醣(Schizophyllan)等抗癌劑，其抗癌的可能機制為刺激巨噬細胞與T淋巴細胞後增強免疫功能所致(丁，2000)。 雲芝又稱彩絨革蓋菌、雜色雲芝、彩絨菌、瓦菌，屬於真菌界、擔子菌門、擔子菌亞門、層菌綱、非褶菌目、多孔菌科、雲芝屬或革蓋菌屬(戴朱，1982；Ainsworth et al.,1973 )。學名Coriolus versicolor，俗稱雲芝。另外亦稱之為Trametes versicolor菌絲系統為三次元，生殖菌絲薄壁，而厚壁的是骨骼菌絲和結合菌絲。其子實體一年生，且只一季產生孢子，雖然它的顏色變異性大，但環生帶狀的蕈蓋卻是它最易於辨別的標記，絨毛毛的輪環將顏色不同的各區隔開地井然有序，是雲芝外表最大的特色(王等，1998)。 在1977年，日本研究人員從雲芝的菌絲中分離出高分子的多醣體PSK（polysaccharide Krestin）在證實其療效後開發為藥物產品，並成為二十世紀最具經濟價值的藥物之一。大約十年後，中國科學家 們發現療效比PSK更好的PSP（polysaccharopeptide），通過 更多的臨床試驗，PSK和PSP被製成藥丸、膠囊、糖漿、茶以及食 品添加物等。 Krestin (雲芝素，略稱PSK)是由日本人所發現，從擔子菌多孔菌 科雲芝菌種CM101菌株的培養菌絲體的熱水抽取物，用硫酸銨飽和，分離所產生沉澱，通過脫鹽等過程。為褐色或帶褐粉末，可溶於水，不溶於甲醇、氯仿、苯、已烷等有機溶劑，水溶液大體成中性，Krestin是由62~80 %的多醣部分與20~38 %的蛋白質部份組合而成(賴，1997)。其中糖質部分由葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖和岩藻糖(fucose)構成，蛋白質部分則由大量的天門冬氨酸(aspartic acid)和麩氨酸(glutamic acid)組成(王，2000)。 雲芝醣肽(PSP)為一種蛋白質結合多醣，由中國人從雲芝Cov-1菌株製造，多醣部分由葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖、阿拉伯糖和鼠李糖構成，PSK和PSP的多醣部分在4’和6’位置皆有β（1→3）glucan分支，兩者都可從雲芝的菌絲體經深層培養萃取而得，也具有相似的生理活性及分子量(~100KD)，但結構卻不相同。 由於雲芝的提取物對腫瘤細胞生長有抑制作用，且對人體無明顯的毒副作用，故在臨床上，已作為癌症免疫療法中的一種常用藥。日本用PSK口服藥治療食道癌、子宮頸癌、乳腺癌等；並用PSK配合化學藥物及放射療法治療轉移性腦腫瘤，而取得顯著的效果。本實驗所採用之菌株為雲芝(Coriolus versicolor)係購自食品工業發展研究所生物資源保存及研究中心。採用之液態基礎培養基成分為Glucose 50 g/L、Yeast extrac