PCR结合基因扫描分析技术对几种深部真菌病致病菌的快速检测及鉴定.pdfVIP

436 ·论著· PCR结合基因扫描分析技术对几种深部 真菌病致病菌的快速检测及鉴定 王英 刘维达顾军 赵敬军 陶苏江 吕桂霞 【摘要】 目的用PcR法快速鉴定22种(23株)深部真菌病致病菌种。方法应用荧光标记的真菌 通用引物ITs4与ITs86对22种(23株)深部真菌病致病菌种的菌悬液进行PcR扩增．扩增产物经ABI PRIsM”377测序仪及基因扫描分析软件精确测定片段大小，与对照组——相应菌种采用传统方法抽提 DNA后扩增片段的扫描分析结果相对照。结果①17种致病菌种菌悬液经ITS4、ITs86扩增出单一的片 段(除了构巢曲霉和黑曲霉、白念珠菌和类星形念珠菌、裴氏着色真菌和皮炎外瓶霉片段长度相同)。②菌 悬液扩增片段的扫描分析结果与其DNA扩增结果相近，差异无显著性。③整个检定过程仅需6h。结论 采用ITS通用引物及菌悬液PcR检测法，结合基因扫描分析技术可准确、特异、快速、敏感地检测并鉴定 出22种深部真菌病致病菌种，这将有望成为快速诊断深部真菌病的一种方法。 【关键词】真菌病；序列分析，蛋白贡；酵母菌；曲霉菌属；瓶霉菌属；孢子丝菌属；分支孢子菌 属；毛霉菌属；镰刀菌属 十、一，，～{ 扎 K／7了iH Detectionandldentmcationof ofSome InfectiomPCRin Rapid PatllogeIlicFungi DeepFungal by Combinati伽稍thGenescan 刚ⅣG Jsu- A眦lysis l，i凡矿，LⅢ形ei一如，Gu血n，刀¨0点n酊un，刚0 Ji叽岛删’GM渐以协ep州mm矿De删02哟r，吼谢反舶叩i￡以 cD蒯心Z如吖胁妣以‰如em咖， ．s^帆咖缸200433，china 【Abstract】 To detectand ofsome objectiverapidly identifypathogenicfungi deepfung“infections PCR．MethodsThe of22 strains)were PCRwith by suspensionspathogenicfungi(23 amplmedby fungal universalITS86andITS4whichwerelabeledFAM．The of was primers by preciselengthampli6edfragments detemlinedABlPRISM枷377 andGenescan then withthatofam— software， by Sequencer aIlalysis compared of DNAwhichwere extracted．Reslllts of17 pliconsconespondingfungal previously (1)Amplmcation withI resultedina forA．n以uZ伽sand rI’：s4，ITS86 fragmentlen群h(except A．凡函er，C pathogenicfungi unique 以6ic吼sand and di肫renceofthe am· E．dermmit汜厶)．(2)No C．steffmoide吼Fp