2017春 植物生物技术实验指导 (自编) -1.doc

生物工程综合实验 生物工程教研编 201年春学期 实验一 植物组培实验室设计和实验设备、实验用品认知 10 实验二 MS培养基母液的配制 13 实验三 MS培养基配制与灭菌 16 实验四 无菌接种操作 19 实验五 外植体分化生长的诱导培养 19 实验六 外植体脱分化生长的诱导培养 24 实验七 组培苗的炼苗 27  实验一 植物组培实验室实验用品 一、目的与要求 1、结合对植物细胞工程安徽省工程技术研究中心植物组织培养生产车间和研究实验室的现场认知，了解掌握植物组织培养实验室的组成和所需的基本仪器设备，学会植物组织培养实验室的设计； 2、为后续植物组培实验课程学习与实训准备所需的相关用品。 1、植物细胞工程技术研究中心；2、生物工程综合实验分室（A514）。 三、内容与方法 （一）关于植物组培实验室的认知与设计 1、组培实验室设计原则 要求环境干燥清洁；符合无菌操作规程要求；满足生产技术流程需要。 2、组培实验室的一般组成与设备 包括化学实验室、洗涤准备室、培养基制备室、无菌操作室、培养室、细胞学观察研究室，等。 （1）化学实验室 各种相关药品的贮存、溶液配制等。 主要设备：药品柜，防尘橱，冰箱，天平，蒸馏水发生器，加热器（电磁炉等），玻璃器皿，等。 （2）洗涤准备室 用于完成相关器具的洗涤、干燥、堆放存储等。 主要设备：洗涤池，洗瓶机，操作台，烘箱，储物架（柜）等。 （3）培养基制备室 用于进行培养基的生产。 主要设备：冰箱，天平，蒸馏水发生器，酸度计，加热器（电磁炉等），玻璃器皿，分装机，灭菌设备，操作台，等。 （4）无菌操作室 主要用于植物材料的消毒、接种、培养物的继代等。无菌室的房间不宜太大，数量根据需要设置。要求干爽清洁，相对密闭，墙地光滑防潮，配置平移门。每一无菌室设内外二间，外间为缓冲室，内间较大，为接种室。 主要设备：紫外灯，超净工作台，臭氧发生器，酒精灯，接种器械（镊子、剪刀、解剖刀、接种针），手推车，等。 （5）培养室 是将接种的材料进行培养生长的场所，大小依规模而定。培养室的设计以充分利用空间和节省能源为原则。 主要设备：空调机加热器增湿器，培养架，光照设备，培养箱，转床，人字梯，等。（）室 主要设备：等。（二）组培实验用品的准备 1、玻璃器皿及规格 （1）培养瓶：100~500 mL的玻璃或塑料培养瓶等； （2）培养皿：9～15 cm； （3）烧杯：100～5000 mL； （4）量筒：10～1000 mL； （5）移液管：1～10 mL； （6）试剂瓶：100～1000 mL； （7）容量瓶：100～1000 mL。 2、接种器械 酒精灯，不锈钢镊子、剪刀、解剖刀等。 3、其它用品 培养瓶封口膜（盖），棉线，记号笔，打包纸（牛皮纸、报纸），转运筐，等。 四、预习思考与作业 1、试分析植物组培苗工厂化生产的车间设计与设备选型。 2、分组准备（领取、洗涤、保管）植物组培实验主要用品。 MS培养基母液配制 1、了解植物组织培养； 2、。 生物工程综合实验分室（A514）。 三、内容与方法 （一） （二）实验MS培养基母液。 、主要试剂 详见表。 仪器用具 天平、烧杯、试剂瓶、量筒、容量瓶、蒸馏水器、加热器、电冰箱等。 、操作 MS培养基的基础配方与母液配制 1MS培养基的配方和母液配制用量 详见表1。2、配制1 L培养基所取母液的量 配制1 L培养基，所取上述各种母液的数量为：大量元素和钙盐母液各50 mL，铁盐、微量元素和有机物的母液各0 mL。铁盐植物激素的母液配制 6-BA、NAA、2,4-D等常用植物激素，可配制成0.1 mg/mL的母液，单独配制和取用。 配制时， 6-BA、NAA、2,4-D等，可先用少量1 M NaOH再加入热水定容。母液 序号 母液 名称 配方成分 分子量 配方用量 （mg/L） 母液 倍数 配1 L母液 称取量（mg） I 大 量 元 素 NH4NO3 80.04 1650 20× 33000 KNO3 101.11 1900 38000 MgSO4·7H2O 246.47 370 7400 KH2PO4 136.09 170 3400 CaCl2·2H2O 147.02 440 20× 8800 II 微 量 元 素 KI 166.01 0.83 100× 83 H3BO3 61.83 6.2 620 MnSO4·4H2O 223.01 22.3 2230 ZnSO4·7H2O 287.54 8.6 860 Na2MoO4·2H2O 241.95 0.25 25 CuSO4·5H2O 249.68 0.025 2.5