生物样品内中药制剂化学 ]成分测定.ppt

冷藏或冷冻 1、血浆和血清：采血后及时分离（2h），短期4℃，长期-20℃ 2、尿样：应立即测定，否则需加防腐剂置冰箱保存 3、唾液：在4℃下保存，往往需要在取样时测定pH值 4、生物样品总的原则：临时解冻，解冻的样品一次测完，不能反复冷冻→解冻→冷冻(FTC)；样品应以小体积分装存放。 第三节 生物样品的制备 第三节 生物样品的制备 五、样品的预处理（掌握） 目的 1. 药物从缀合物中释放，测定总浓度 2. 纯化、富集药物 3. 适应和满足测定方法要求的灵敏度 4. 防止对分析仪器的污染和劣化 第三节 生物样品的制备 五、样品的预处理（掌握） （一）提取方法的选择依据 （二）药物的提取 （三）药物的分离与净化 （四）待测组分的富集 （五）衍生物处理 第三节 生物样品的制备 （一）提取方法的选择依据 药物的理化性质 药物的浓度范围 药物测定的目的 生物样品的类型 样品处理与分析技术的关系 第三节 生物样品的制备 （二）药物的提取 1、蛋白质处理：干扰分析、污染测定条件 2、缀合物水解：测定母体药物 3、水溶性强的药物：冷冻干燥，冻干后进行液－固萃取 第三节 生物样品的制备 1、蛋白质处理 加入与水相混溶的有机溶剂 有机溶剂使蛋白质的分子内及分子间的氢键发生变化 沉淀剂：乙腈（1.5倍）、甲醇（2倍） 乙醇、丙酮：很难挥干浓集 超速离心（10000r/min） 去除90％蛋白 加保护柱 第三节 生物样品的制备 1、蛋白质处理 加入中性盐 蛋白质脱水沉淀 沉淀剂：硫酸铵、硫酸钠、镁盐、枸橼酸盐 1：2 90％去除 超速离心（10000r/min） 第三节 生物样品的制备 1、蛋白质处理 加入强酸 常用溶剂（与蛋白质阳离子形成不溶性盐沉淀）：10％三氯醋酸、6％高氯酸、硫酸－钨酸混合液体积比：1：0.6 90％去除 方法：超速离心（10000r/min） 第三节 生物样品的制备 1、蛋白质处理 沸水浴 超滤、透析法（游离药物浓度） 第三节 生物样品的制备 2、缀合物水解 含义：中药制剂待测成分或其代谢物与体内的内源性物质结合生成的产物 特点：缀合物极性较母体药物大，亲水性强，不易被有机溶剂提取，需水解处理 第三节 生物样品的制备 2、缀合物水解 水解方法：酸水解，酶水解（葡萄糖醛酸苷酶，芳基硫酸酯酶），溶解剂 趋势：直接测定缀合物的量，了解药物代谢情况 第三节 生物样品的制备 3、冷冻干燥 特点：适合于一次不能完成分析的大批量生物样品、水溶性样品、挥发性样品和对热不稳定的样品 方法：干冰－丙酮浴、用液氮、冷冻干燥仪 第三节 生物样品的制备 （三）药物的分离和净化 1、液－液萃取（liquid-liquid extraction, LLE) 2、液－固萃取(liquid-solid extraction, LSE) 第三节 生物样品的制备 1、液－液萃取（liquid-liquid extraction, LLE) 大多数药物都是脂溶性的，内源性物质基本上都是水溶性的，当用有机溶剂萃取时，药物被萃取出来而内源性物质被除去，因此采用有机溶剂萃取法能够达到纯化的目的 第三节 生物样品的制备 1、液－液萃取（liquid-liquid extraction, LLE) 关键要考虑三个方面的因素： （1）有机溶剂的特性 （2）有机溶剂相和水相的体积 （3）水相的pH值 第三节 生物样品的制备 1、液－液萃取（liquid-liquid extraction, LLE) 萃取率应不低于50％ 影响提取率的因素： 水相的PH值 提取溶剂：低沸点、低毒性（乙酸乙酯）、无水Na2SO4脱水 离子强度：加入氯化钠，有利于提取，减少乳化 1、液－液萃取（liquid-liquid extraction, LLE 血浆或其他生物样品 加入萃取溶剂 分取有机层 必要时调pH值 减压氮气吹干 流动相溶解后进样分析 1、液－液萃取（liquid-liquid extraction, LLE 消除LLE中产生的乳化现象： 1、提取前在水相中加入适量的固体食盐 2、经适当转速离心消除已产生的轻微乳化 3、置于冰箱中快速冻凝破坏乳化层，再融化后离心来消除已产生的严重乳化现象 第三节 生物样品的制备 1、液－液萃取（liquid-liquid extraction, LLE) 离子对提取法 原理：一些酸性或碱性较强的有机药物在体液中呈离解状态，成为亲水性极强的带电荷离子，控制PH值也不能抑制其解离，不能用有机溶剂将其自体液中提取出来。加入离子对试剂，使其成为具有一定脂溶性的离子对化合物，用有机溶剂将其自水相中萃取分离。 1、