第二章 酶分类和反应.ppt

第二章 酶的分类及其催化的 化学反应;;六大类酶分别是： 氧化还原酶 转移酶 水解酶 裂合酶 异构酶 连接酶 ;2.2 氧化还原酶（oxidoreductase EC 1.x.x.x） 氧化还原酶催化底物氧化或还原。一些氧化还原酶 需要辅酶NADH或NADPH、FDA或FMN.如乳酸脱氢酶。 一些氧化还原酶不需要辅酶如葡萄糖氧化酶。 生物催化的氧化反应中常用三类重要的氧化酶： 单加氧酶、双加氧酶和氧化酶;2.3 单加氧酶（mono-oxygenases） ;;;;微生物催化异丁酸不对称羟化反应; 已研究了上百种微生物对非天然脂肪族羟化反应。 底物中有极性基团(如乙酰胺）等，有利于底物在酶活性中心的定向，羟化反应的发生在离极性基团0.33nm-0.62nm范围内。 环状的烷烃羟化的优先次序为环庚基、环己基、 环戊基。;少根根霉或黑曲霉; 就单加氧酶而言，目前尚不能对一个底物的氧化位 点作出预测。但有三种方法可以用来改进生物羟化反应 的区域选择性和立体选择性： （1） 改变培养条件，增加细胞代谢压力； （2）广泛筛选不同的微生物菌种 （3）底物修饰 ;;;;烯烃的环氧化;不需要辅酶的参与，但过氧化氢可使CPO失活;硫原子的氧化反应;;;Baeyer-Villiger 反应 利用过氧酸氧化酮生成酯或内酯的化学反应机理;;;生物催化法的立体选择性比化学法高;;;;2.4 双加氧酶（dioxygenase）;烯烃的氢过氧化反应 大豆脂氧酶催化亚油酸的氢过氧化反应;;芳烃的双羟基化反应 ;;;2.5 氧化酶;氧化酶有黄素氧化酶（如葡糖糖氧化酶等）； 金属黄素蛋白氧化酶（醛氧化酶）； 血红素蛋白氧化酶（过氧化氢酶、过氧化物酶）等 脱氢酶可以催化氧化和还原双向可逆反应，在有机 合成中，一般以催化还原反应为主 ;;辅酶的循环使用;; 从博伊丁假丝酵母得到的FDH是大规模、经济地再生 NADH的好方法，但不宜用于NADPH的再生 应用基因工程从假单胞菌中克隆的FDH适合NADPH 的再生;6-磷酸葡萄糖脱氢酶（GDH）可将 6-磷酸葡萄糖( G6PDH ） 氧化为6-磷酸葡萄糖酸内酯，后者再自发转变为6- 磷酸葡萄 糖酸，并产生NADPH。是一个很好的NAPDH的再生系统。 ; 乙醇-醇脱氢酶体系，酶价格适中，乙醛及乙醇 易于从体系中挥发出来。需要及时除去乙醇或乙醛，否者会抑制酶的活性;人工电子传递体;人工电子传递体的还原态可以直接或间接地再生NADH，传递体的氧化态可被 廉价的还原剂（如氢、甲酸、一氧化碳等）经生物催化再生。;;脱氢酶用于还原反应 ;;;马肝醇脱氢酶（HLADH）;;;酵母细胞催化酮还原;1 简单酮的还原 一般只能还原甲基酮，遵循Prelog规则。 ;?-酮酯的还原 ?-酮酯易被酵母细胞还原为?-羟酯，后者可作为 内酰胺、昆虫激素和类胡萝卜素等合成的手性源。;;??-单取代-?-酮酯 ?-单取代-?-酮酯有两个潜手性中心，因此它 被酵母细胞还原时，可以得到四种可能的非对映 异构体?-羟基酯，通过选择恰当的微生物可以得 到所需构型的产物。; ?-单取代-?-酮酯还原得到非对映体顺式和反式 ?-羟基酯，其产物的比率不是1：1，这是由于烯醇 化引起的快速原位消旋，从而改变了动力学拆分结 果。顺、反非对映体的比率取决于还原过程中酶的 立体选择性，有时可高达100：0 ;;;途径 R1 R2 R3 生物催化剂 产率 d.e.% e.e.% A Me 烯丙基 Et 面包酵母 94 92 99 B Me Me Et 白地霉 80 98 98 C 4-MeOPh- Cl Et 流放侧孢 52 96 98 D 4-MeOPh- Cl Me 不明毛霉 58 98 99;酵母细胞催化烯烃还原 生物催化潜手性烯烃双键的还原具有立体选择 性，这是常规化学还原所无法实现的。微生物中 含有的烯酸还原酶负责这一催化反应，该酶也需要 辅酶NADH，氢反式加成到双键上。 ?