聚合酶链反应及基因突变检测方法-上海交通大学医学院医学检验系.PPT

聚合酶链反应及基因突变检测方法 上海交通大学医学院 刘湘帆 讲师 聚合酶链式反应于1983年由美国Cetus公司的K.Mullis建立，并和定点突变的发明者M.Smith一起荣获1993年度诺贝尔化学奖，为生命科学领域的研究开创了崭新时代。 一、PCR反应原理和反应过程 DNA的体外复制包括3个步骤： 变性（denaturation）:94 ?C ~95 ?C 退火（annealing）:40 ?C ~70 ?C 延伸（extension）:72 ?C 3个步骤作为PCR的一个循环，每当完成一个循环，一个分子的模板被复制为二个，产物量以指数形式增长。 二、PCR的反应体系和反应条件 （一）PCR反应体系 参与PCR反应的主要成份: 模板、引物、dNTP、Taq DNA聚合酶和 缓冲液等。 1 模板 包括基因组DNA、RNA、质粒DNA、线粒体DNA等 模板DNA需较高的浓度 RNA作为模板时，须先将RNA逆转录为cDNA，再以 cDNA作为扩增的模板 模板量：1000ng、500ng、100ng、50ng? 2、引 物（Primers) 引物决定PCR扩增产物的特异性和长度，是化学合成的寡核苷酸片段 化学合成的寡核苷酸 能与模板特异地结合 引物决定产物的特异性和长度 引物设计时必须遵循一些原则 设计