梅山猪和长白猪肌肉组织间正反向消减cDNA文库的构建1.PDFVIP

____________________________________________________________________________ 遗传学报，2003 ，30 （7）：668-672 梅山猪与长白猪肌肉组织间正反向 消减cDNA文库的构建1 1 2 1* 2 1 1 徐德全 ， 张义兵 ， 熊远著 ，桂建芳 ，蒋思文 ，苏玉虹 1华中农业大学农业部猪遗传育种重点实验室 （430070） 2中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室 （430072） E-mail:xiongyzh@ 摘 要：以梅山猪和长白猪的背最长肌为材料，利用抑制性消减杂交技术，成功构建了梅山 猪与长白猪肌肉组织间正反向消减cDNA文库。以管家基因G3PDH作为消减指标，检测梅山猪 10 5 和长白猪两个消减文库的消减效率分别高达2和2倍，表明某些特异于两种肌肉组织的差异 10 5 表达基因的富集效率也分别接近2和2倍。从两个消减文库中分别筛选到了709和673个有 效阳性克隆，PCR鉴定插入片段长度主要分布于150～750bp之间。不同猪种肌肉组织间消减 cDNA文库的构建为进一步分离和鉴定影响肌肉生长和肉质的基因奠定了基础，对探讨肌肉生 长机理和肉质决定因素，以及应用于分子育种具有重要意义。 关键词：猪 肌肉组织 差异表达基因 消减cDNA文库 抑制性消减杂交 1．引言 国内外猪种由于来源、长期所处的地理环境以及所接受的饲养方式和选育性状重点的不 同，使其在肌肉的生长和肉质等方面各有优缺点。其中，梅山猪不仅以产仔数高闻名于世， [1] 且肉质优于欧洲猪种，但其具有较低的日增重和瘦肉率以及较厚的背膘 。合理利用这些差 异，弄清这些差异的原因，将为猪育种提供有效的途径。 细胞遗传学研究表明，中外猪种的染色体C带型、Ag-NOR多态性存在差异，甚至被公认 [2] 为比较稳定的G带型和Q带型也发现多态的存在 。分子遗传学研究更明确地表明中外猪种基 [3] 因组存在明显的差异，这些差异不仅包括单个碱基或少量碱基的不同，如FOS等；而且包含 [4] 较大片段的差别 。但目前还很少有中外猪种基因表达水平差异的研究，而研究中外猪种基因 表达的差异是弄清导致中外猪种性状差异原因的重要途径之一。抑制性消减杂交 [5] （SuppressionSubtractiveHybridization，SSH） 技术是继 mRNA差异显示 （mRNA [6] DifferentialDisplay，DD）技术 和代表性序列差别分析 （RepresentationalDifference [7] Analysis，RDA）技术 之后又一新的表型克隆技术，其克服了DD技术假阳性率高和RDA技术 消减杂交轮次较多的缺点，且对高、低丰度的差异表达基因都可有效分离。利用其研究中外 猪种基因表达水平的差异，将对中外猪种性状差异原因的探讨具有重要的意义。 [8] 猪骨骼肌基因对猪肌肉的生长和肉质具有重要的决定作用 。本研究利用SSH技术构建了 梅山猪与长白猪肌肉组织间正反向消减cDNA文库，用于中外猪种肌肉生长和肉质差