A05菌种制作技术.ppt

第五讲 一级菌种制作技术;一级菌种制作技术;一、一级菌种制作流程;制种流程;二、一级菌种培养基的配制;2、一级菌种培养基常用配方;(二) 母种生产技术;(二) 母种生产技术;(二) 母种生产技术;(二) 母种生产技术;(二) 母种生产技术;;煮沸20min，取定量滤液;（一）营养液制作　1.　准备工作; ;3.　熬煮 　　将切好的马铃薯块加适量水后放入电饭锅中，煮至酥而不烂（煮沸后30min）。;4.　过滤、加可溶药物 　用双层沙布过滤，取滤汁，放在电饭锅中加入糖;5.　熬琼脂、定容 　　在沸腾状态下加入琼脂，直到琼脂完全溶化为止，定容至1000ml。;（二）营养液分装 　 1.　用注射器分装 　 2.　分装标准:分装量为试管长度的1/4—1/5。注意培养基不能沾污试管口。;3.塞棉塞 　　棉塞松紧适度，1/3在管外，2/3在管内。 4.扎捆 　　7-10支试管捆在一起，棉塞上包好防水纸，直立放入高压灭菌锅中。;（三）灭菌处理 在1.0—1.5 kg/cm2压力下维持20--30min。;(四)　摆斜面 　　灭菌结束后锅盖开1/5的小缝，用余热烘干报纸和 棉塞，然后摆斜面。斜面长是试管总长的1/2;三、一级菌种培养基的灭菌;（二）灭菌与消毒的方法;干热灭菌; 湿 热 灭 菌 ;高压灭菌;常压灭菌;2、常用的消毒方法;空间消毒;器具消毒;;（三）一级菌种培养基的灭菌;3．操作过程 加水?装锅?盖盖?加热?当压力升为0.5kg/cm2时排放冷空气?正式升压?保压（1.1kg/cm2，121℃，保持20-30min）?停止加热?自然降压至零?排放余汽?开盖?取出灭菌物品?趁热摆斜面?检验灭菌效果（32℃空白培养48h）。 ;四、菌种分离及纯化;无菌操作要点;（三）菌种分离的设备 1．接种箱：操作规程 2．净化工作台：操作规程 3．接种室：操作规程;接种工具;（四）菌种分离的方法（常用的三种）;操作示范; 选择种菇→表面消毒（75%酒精或0.1%升汞）→撕成两半→取菌柄菌盖交界处→小块菌肉→移入PDA→培养→观察→转管→纯种 上述分离物在25℃下，经3d~5d可看到分离物表面长出白色绒毛状丝，每隔1d~2d检查1次，随时淘汰霉菌、细菌污染的培养物，培养10d~15d，再作1次转管即得到纯种。 ;注： ⑴取组织块不要贪大，因组织块小易定植; ⑵有些食用菌不易用组织分离法获纯种； ⑶不同的食用菌切取部位和消毒方法不同。 如：1）红菇、乳菇等，因它们菇体细胞已泡囊化，再生能力极弱； 又如：2）银耳和木耳等胶质菌，它们子实体中菌丝含量极少，组织分离法不易成功。而只能取其生长的基质即菇木、耳木分离。 ;孢子分离法;⑴孢子分离法 利用孢子在适宜培养基上形成菌丝来获得纯菌种的方法。 ;孢子分离法;;;悬钓法 此法主要用于耳类（黑木耳、毛木耳、银耳等）孢子的采集。 耳片（表面消毒） → 悬挂于培养基上方→培养→ →取出挂钩与耳片→继续培养→挑取先端菌丝→转管纯化→母种?;;;;基内菌丝分离法;段木内菌丝分离法： 取1~2cm菇木、耳木（子实体着生部位）→去皮→消毒（75%酒精或0.1%升汞浸泡1min）→切去四周木块→切成火柴杆粗细，0.5 cm长的小木梗→取1根放入试管斜面上→培养→取菌丝→转管纯化;;五、菌种的纯化 用孢子、组织或基质分离法得到的菌种，一般不宜直接用于生产，必须经过提纯方可应用。 提纯操作：选稀疏单菌落→边缘取菌→接种试管斜面（3~5支）→培养→纯菌种。;五、菌种的纯化;扩大繁殖：提纯的母种或从有关单位引进的母种，数量均很少，应扩大繁殖后再用。 在母种繁殖时，最好一次多移些，不宜多次转管，以免影响出菇率，降低产量和质量。 一支斜面母种可移接40支左右斜面试管。;六、一级菌种转管及扩大培养;母种 培养;母种转管及培养的操作过程：;一、母种转管无菌操作技术要点： 1.将接种用品及原始母种放入接种箱内。 2.用菇保1号、气雾消毒盒（2g/m3）或甲醛进行熏蒸，时间要在30分钟以上。 3.手、台面、接种工具、母种管用酒精棉球擦试消毒。 4.点燃酒精灯，火焰灼烧接种镐至烧红后冷却，凡能伸进试管的杆部均过火灭菌。 ; 5．左手大拇指和其他四指并拢握住菌种管和待接试管， 斜面向上，并保持水平。 ;6．右手小指、无名指及手掌拔掉棉塞，用火焰灼烧 试管口并不断搅动。; 7．先弃去前端1cm处，然后用接种镐快速移取黄豆粒大小的菌种入待接试管斜面培养基中央。; 8．灼烧试管口，并将棉塞在火焰上迅速过一下然后 塞上。 9．用接种镐挑持住母种