转基因鸡生物反应器载体的构建及其表达特性分析.pdfVIP

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2011, August 25; 27(8): 1215−1224 Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@ ©2011 CJB, All rights reserved. 组织工程与细胞培养 转基因鸡生物反应器载体的构建及其表达特性分析 杨鹏翔，王曦晨，王宇祥，王启贵，李辉 东北农业大学动物科学技术学院，哈尔滨 150030 摘 要: 以增强型绿色荧光蛋白和萤火虫荧光素酶为报告基因，构建了鸡卵清蛋白启动子表达载体和慢病毒载体，以 巨细胞病毒 (Cytomegalovirus ，CMV)启动子表达载体为对照，转染或感染鸡原代输卵管上皮细胞、鸡胚成纤维细胞、 鼠3T3-L1 前脂肪细胞和牛乳腺上皮细胞，通过荧光和酶活性检测，旨在筛选出用于实现转基因鸡生物反应器的高效特 异性表达载体。结果发现，鸡卵清蛋白启动子表达载体转染以上 4 种细胞后 2 种标记基因均有表达，没有表现出明显 的细胞特异性，且荧光素酶检测结果表明其在各细胞组中表达活性都低于CMV 启动子表达载体 100 倍以上；慢病毒载 体感染以上 4 种细胞后 2 种标记基因均有表达，在鸡输卵管上皮细胞组感染单个细胞的病毒颗粒 (Multiplicity of infection ，MOI) 为20 时绿色荧光蛋白表达量就可以达到CMV 启动子表达载体的水平。上述结果表明，基于卵清蛋白 基因调控序列构建的表达载体无法实现外源基因的高效、特异性表达，而慢病毒载体在表达活性和广泛性上可以用于 进行鸡输卵管生物反应器的研究。 关键词: 转基因鸡生物反应器，输卵管上皮细胞，鸡卵清蛋白启动子表达载体，慢病毒载体 Construction and expression characterization of transgenic chicken bioreactor vector Pengxiang Yang, Xichen Wang, Yuxiang Wang, Qigui Wang, and Hui Li College of Animal Science and Technology, Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China Abstract: We constructed transgenic chicken bioreactor vector, driven by chicken ovalbumin promoter, lentiviral vector and cytomegalovirus (CMV) promoter control vector encoding green fluorescent protein (GFP) and luciferase (Luc) as reporter genes. The three vectors were used to transfect or infect chicken primary oviduct epithelial cells, embryo fibroblasts cells, mouse 3T3-L1 preadipocytes cells and bovine mammary epithelial cells. High efficient and specific expression vector for transgenic chicken bioreactor was determined by detecting fluorescence and luciferase activity. R