透明质酸单克隆抗体的制备及免疫分析方法的建立-中国药科大学.pdfVIP

学 报 ７４０ ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　２０１５，４６（６）：７４０－７４４ 透明质酸单克隆抗体的制备及免疫分析方法的建立 罗凯明，赵　虎，高向东 （中国药科大学生命科学与技术学院，南京２１０００９） 摘　要　将１氰基４二甲胺吡啶四氟硼酸盐（ＣＤＡＰ）活化后的透明质酸（ＨＡ）与牛血清白蛋白（ＢＳＡ）共价偶联制备完 全抗原ＢＳＡＨＡ，纯化后免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，采用杂交瘤技术制备 ＨＡ特异性单克隆抗体，考察单抗的生物学特性，并建立 ＨＡ定量免疫分析方法———间接竞争ＥＬＩＳＡ法。研究表明，完全抗原ＢＳＡＨＡ免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠后，能诱导ＨＡ特异性抗体 的分泌；经细胞融合、选择性培养、筛选和亚克隆，获得一株稳定分泌ＨＡ特异性抗体的杂交瘤细胞８Ｂ６，其腹水抗体效价达 ９ －１ １∶２５６０００以上，亲和常数为６７１×１０ｍｏｌ ，独特型为ＩｇＧ１；以１００ｎｇ／ｍＬＨＡ包被酶标板，１０％ ＢＳＡ为封闭剂，建立 ＨＡ间接竞争ＥＬＩＳＡ法，其线性范围介于００１～１００ ｇ／ｍＬ，特异性好、灵敏度高。 μ 关键词　透明质酸；单克隆抗体；间接竞争ＥＬＩＳＡ；免疫分析 中图分类号　ＴＱ３２３　　文献标志码　Ａ　　文章编号　１０００－５０４８（２０１５）０６－０７４０－０５ ｄｏｉ：１０．１１６６５／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－５０４８ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆａｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙａｇａｉｎｓｔｈｙａｌｕｒｏｎｉｃａｃｉｄａｎｄｉｔｓａｐｐｌｉｃａ ｔｉｏｎｉｎｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  ＬＵＯＫａｉｍｉｎｇ牞ＺＨＡＯＨｕ牞ＧＡＯＸｉａｎｇｄｏｎｇ ＳｃｈｏｏｌｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ牞ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ牞Ｎａｎｊｉｎｇ２１０００９牞Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｔｈｉｓｓｔｕｄｙｗａｓｔｏｄｅｖｅｌｏｐａｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｆｏｒｈｙａｌｕｒｏｎｉｃａｃｉｄ牗ＨＡ牘．Ｗｅｆｉｒｓｔｌｙｐｒｅｐａｒｅｄａ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙ牗ＭＡｂ牘ａｇａｉｎｓｔｉｔＨＡ牞ａｃｔｉｖａｔｅｄｂｙ１ｃｙａｎｏ４ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｐｙｒｉｄｉｎｉｕｍｔｅｔｒａｆｌｕｏｒｏｂｏｒａｔｅ 牗ＣＤＡＰ牘牞ｗａｓｃｏｕｐｌｅｄｔｏｂｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍａｌｂｕｍｉｎ牗ＢＳＡ牘ＢＡＬＢ／ｃｍｉｃｅｗｅｒｅｉｍｍｕｎｉｚｅｄｗｉｔｈｐｕｒｉｆｉｅｄｃｏｍｐｌｅｔｅ ａｎｔｉｇｅｎＢＳＡＨＡａｎｄｔｈｅｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｗａｓｐｒｅｐａｒｅｄｂｙｈｙｂｒｉｄｏｍａｔｅｃｈｎｉｑｕｅＴｏｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｔｈｅｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆｔｈｅａｎｔｉｂｏｄｙ牞ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｅｎｚｙｍｅｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔａｓｓａｙ牗ＥＬＩＳＡ牘ｗａｓｃｏｎｄｕｃｔｅｄａｎｄｔｈｅｃｒｏｓｓｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ ａｌｏｎｇｗｉｔｈａｆｆｉｎｉｔｙｃｏｎｓｔａｎｔｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｄｅｇｒｅｅｏｆＢＳＡＨＡ牗ｍ ／ ＢＳＡ ｗ 牘ｗａｓａｂｏｕｔ９Ａｌｓｏ牞ａｈｙｂｒｉｄｏｍａｃｅｌｌｌｉｎｅｎａｍｅｄ８Ｂ６ｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄｂｙｈｙｂｒｉｄｏｍａｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．Ｔｈｅｉｎｄｉｒｅｃｔ ＨＡ ＥＬＩＳＡｔｉｔｅｒｏｆｔｈｅａｓｃｅｔｉｃｆｌｕｉｄｗａｓ１∶２５６０００牷ｔｈｅｉｓｏｔｙｐｅｏｆＭＡｂ８Ｂ６ｗａｓＩｇＧ１ａｎｄｔｈｅａｆｆｉｎｉｔｙｃｏｎｓｔａｎｔｗａｓ ９