MS—RDA的改进及在白背飞虱的应用研究.pdfVIP

第52卷 第5期 中山大学学报 (自然科学版) Vo1．52 No．5 2013年 9月 ACTA SCIENTIARUM NATURALIUM UNIVERSITATIS SUNYATSENI Sep． 2013 MS—RDA的改进及在 白背飞虱的应用研究 周晓穗，陈佳林 ，张 梅 ，王方海 (中山大学有害生物控制与资源利用国家重点实验室∥昆虫学研究所，广东广州510275) 摘 要 ：甲基化敏感性代表性差异分析方法 (MS—RDA)适用于特异、低丰度基因组DNA甲基化的筛查与鉴 定，已大量应用于哺乳动物的疾病发生和植物发育机理方面的研究 ，但昆虫中尚未发现该方法的应用。从 DNA 提取、酶切、扩增子制备、消减杂交等方面对该方法进行了改进，并在水稻重要害虫 白背飞虱上得到成功应用， 获得了4条与雌、雄性别相关联的特异性甲基化差异条带，其中有 3条序列 已被GenBank收录，登陆号分别为 JX847621、JX624161、JX472453，经BLAST比对，有3条未发现同源性序列 ，属于功能未知的新基因；同时还 获得了2条与长短翅型相关联 的特异性甲基化差异条带，也 已被 GenBank收录，登陆号分别为 JX514031、 JX472454，同源性分析发现与多种动物的18S核糖体和28S核糖体RNA基因序列高度相似，因此有关核糖体基 因的甲基化可能对 白背飞虱的翅型分化起到一定的调控作用。 关键词 ：MS—RDA；DNA甲基化；白背飞虱；翅二型 中图分类号：Q965 文献标志码 ：A 文章编号：0529—6579(2013)05—0118—05 TheImprovementofM S-RDA andItsApplication in Sogatellafurcifera(Horvath) ZHOUXiaosui，CHENJialin，ZHANGMei，WANGFanghai (StateKeyLaboratoryforBiocontrolandInstituteofEntomology，Sunrat-senUniversity， Guangzhou510275，China) Abstract：Methylation-sensitiverepresentationaldifferenceanalysis(MS—RDA)issuitableofrscreening andidentificationofspecificandlow abundancesgenomicDNA methylation．Ithasbeenappliedinmany researchesonmammaldiseaseoccurrenceandplantdevelopmentalmechanism，butnoapplicationwas reportedin insects．Inthisstudy，we developedaMS-RDA methodofrinsects，whichwasimproved from DNA extraction，restrictionenzymedigestion，ampliconpreparation，andcompetitivehybridization． ThemethodwasfurtherappliedsuccessfullyinSogatellaf~rcifera(Horvath)，animportantricepestin China．FourdifferentiallymethylatedDNA sequencesrelatedwithfemaleandmalewereobtained．Three ofthem hadbeenacceptedbyGenBank，theaccessionnumberswereJX847621，JX624161，JX472453， respectively．Threeofthem werenotofundhomologoussequencesbyBLASTandshouldbebelongingto t