高中生物核心概念高考复习讲稿-微生物培养与应用B.ppt

（二）样品稀释 （1）测细菌数：一般用104、105、106稀释液 （2）测放线菌：一般用103、104、105稀释液 （3）测真菌数：一般用102、103、104稀释液 原则：确保平板上的菌落数在30～300之间。 （三）微生物的培养与观察 1、接种：用适当的稀释液作涂布平板 2、培养：细菌：30～37℃，1～2d; 放线菌:25～28℃, 5～7d; 霉菌: 25～28℃, 3～4d. 3、观察：a.每24h统计一次菌落数目 b.以“稳定菌落”为观察对象 　　 （四）鉴定 鉴别培养基：不影响微生物的生存 酚红培养基： 鉴定分解尿素的细菌 原理：脲酶催化尿素分解成氨→培养基碱性增强→ 酚红变红→脲酶阳性 纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、 CX酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。 纤维素 纤维二糖 葡萄糖 C1酶 Cx酶 葡萄糖苷酶 背景知识 滤纸崩溃法 纤维素酶活性的测定实验： 背景知识 刚果红可以与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，我们可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。 背景知识 实验流程示意图 一、实验目的 二、实验原理 三、所需仪器、材料、用具和药品 四、实验的方法和步骤 五、分析结果 实验设计 * 主要内容： 大肠杆菌的纯化培养 分解尿素的细菌的计数 分解纤维素微生物的分离 类型 具体内容 微生 物的 培养 利用 微生物的培养与分离 某种微生物数量的测定 培养基对微生物的选择作用 利用微生物进行发酵来生产特定的产物 发酵过程中亚硝酸盐含量的测定 技术 方法 利用 考纲要求：微生物的培养和利用 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方 H2O 定容至1000ml Nacl 5g 蛋白胨 10g 牛肉膏 5g 琼脂20.0g 大肠杆菌的纯化培养： ㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 1.计算： 培养基用量 依配方计算各成分的用量 2.称量： 3.溶化： 牛肉膏黏稠，用称量纸称取 牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖 牛肉膏、称量纸 、少量水加热溶解 →取纸 →蛋白胨、NaCl →琼脂 →补水定容 4.调pH、分装、封口： 5.灭菌： 6.倒平板： 培养基、培养皿 分散成单个细胞, 形成单个菌落 倒平板 约50℃ 防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染 灼烧灭菌， 防止瓶口的微生物污染培养基 平板划线法 为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物 杀死上次残留的菌种，保证使下一次划线时，菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。 及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 6支试管，分别加入9ml无菌水 1ml 101 1ml 102 1ml 103 1ml 104 1ml 105 1ml 106 ⑵稀释涂布平板法： a.梯度稀释菌液： 菌液 微量 移液器 ⑵稀释涂布平板法： a.梯度稀释菌液： b.涂布平板： 不超过0.1ml 各梯度分别涂布3个平板 1个不涂布作空白对照 滴 灼 试 涂 稀释103倍 稀释104倍 稀释105倍 ⑴平板划线法： 大肠杆菌的纯化培养： ㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 ㈡纯化大肠杆菌： 1.接种： ⑵稀释涂布平板法： 2.培养： 将接种后的培养基和一个未接种的培养基 放入37℃恒温箱中培养12h～24h后， 观察并记录 菌种的保藏： 1.临时保藏： 试管固体斜面培养基上 4℃ 2.长期保存： 菌种易被污染、变异 甘油管藏 1ml甘油＋1ml菌液 －20℃ 尿素[CO(NH2)2]——重要的农业氮肥。 只能被土壤中细菌分解为NH3才能被植物吸收利用 CO(NH2)2 + H2O CO2 +2NH3 细菌脲酶 筛选菌株 提出的问题 —如何寻找耐高温的酶？ 解决问题的思路 —寻找耐高温环境； 原理 —高温淘汰其他菌，选出耐高温细菌， 耐高温菌种提取耐高温酶。 筛选菌株KH2PO4 1.4g NaHPO4 2.1g MgSO4 H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿