基因工程原理及其在食品工业中的应用(第一节课程回顾).ppt

课程回顾 ; 3.基因表达（gene expression） 遗传信息转录和翻译的过程。 （1）转录。在DNA分子上合成出与其核苷酸顺序相对应的RNA的过程。 （2）翻译。在RNA的控制下，根据核苷酸链上每三个核苷酸决定一个氨基酸的三联体密码规则，合成出具有特定氨基酸顺序的蛋白质肽链过程。 （3）逆转录。以RNA为模板，按照RNA中的核苷酸顺序合成DNA的过程。;4.重组DNA技术（recombinant DNA technique） 利用限制性内切核酸酶、连接酶等酶类将不同的DNA进行体外切割、连接构成新的DNA分子的技术。 5.基因工程（gene engineering） 以分子遗传学为基础，利用人工方法把生物的遗传物质分离出来，在体外进行切割、拼接和重组。然后将重组的DNA导入某种宿主细胞中，从而改变它们的遗传性质；也可以使新的遗传信息在新的宿主细胞中大量表达，以获得基因产物（多肽或蛋白质）。这种创新新生物并赋予新生物以特殊功能的过程就称为基因工程。 6.食品基因工程 利用基因工程的技术和手段，在分子水平上定向重组遗传物质，以改良食品的品质和性状，提高食品的营养价值、贮藏价格性状以及感官性状的技术。;（二）基因工程的三大理论和三大技术基础 1.三大理论基础 （1） 20世纪40年代Avery等人的肺炎球菌的转化试验证明了生物的遗传物质是DNA。 （2） 20世纪50年代Watson和Crick发现了DNA分子的双螺旋结构及DNA半保留复制机理。 （3） 20世纪60年代Crick关于遗传中心法则的确立，即生物体中遗传信息是按DNA→RNA→蛋白质方向进行传递。 2.三大技术基础 （1）如何从生物体庞大的双链DNA分子中将所需要的基因片段切割下来--“基因剪刀”－限制性内切酶的发明 （2）如何将切割下来的基因片段进行繁殖扩增--载体(“交通工具车子”)－基因工程技术诞生的第二个技术准备 （基因载体）。 （3）逆转录酶－1970年Baltimove和Temin等同时各自发现了逆转录酶，打破了遗传学（生物学）中心法则，使真核基因的制备成为可能。;二、基因工程的工具酶 ;2.限制酶的切割位点： 限制性对dsDNA 2条链同时切割（其具体切割点，即磷酸二酯键断开的位点，相对二重对称轴的位置而异）产生3种不同切口： 1．? 形成平头末端（flush或bluntend）在识别序列对称轴处平齐切割DNA两条链而形成的平头双链末端。如 －TC↓GA-smaⅠbsuRⅠ or –TC3ˊ+5ˊGA- －AG↓ CT-AluⅠ -AG5ˊ+3ˊCT- 2.形成5′－粘性末端 （5′－cohesive end即3′延伸末端） 5′-GAATTC3′EcoRⅠ 5′-G AATTC-3′ + 3′-CTTAAG5′ 3′-CTTAA G-5′ 3.形成3′－粘性末端（3′－cohesive end） 5′CTGCAG 3′ pstⅠ G-3′ 5′-CTGCA + 3′GACGTC 5′ ACGTC-5′ 3′-G 粘性末端（sticky end）—限制酶切割DNA双链而形成彼此互补的单链末端。;表2-1 限制性内切核酸酶的类型及主要特性 ;(二)．DNA连接酶： DNA连接酶是基因工程第二位重要的工具酶，常用T4DNA ligase. 1.功能：催化有互补顺序的两个dsDNA分子的粘性末端或平头末端3′－OH、5′－P连接作用。 2.来源－噬菌体T4感染Ecoli分离的一种单链多肽酶、MW.68KD（1KD=1000道尔顿）。 3.催化反应： （1）需要ATP、Mg2+作辅助因子； （2）缺刻（Nick）DNA也可作该酶的底物。 （3）对粘性末端催化活性大于平头末端（酶量1：100） ;(三)、逆转录酶 1.概述 逆转录酶也称反转录酶或RNA依赖的DNA聚合酶（RNA dependent DNA polymerase,RDDP）。 2.功能 基因工程中主要用于逆转录mRNA→cDNA（complementory DNA）。使用该酶可以获得目的基因，也可以用来标记cDNA作为放射性探针. 3.商品化逆转录酶有两种 ①AMV（禽成髓细胞瘤）②Mc-MLV(鼠白血病病毒)。;三、