临床细菌学检验技术.ppt

第三章 临床细菌学检验技术;本章学习目标; 第一节 细菌形态学检查 是用普通光镜、相位差显微镜、荧光显微镜、电镜，通过染色或不染色标本,观察细菌菌体的形态、大小、排列、特殊结构及染色反应等,是对细菌鉴定的一种手段。 意义？**P45 ——通过细菌形态学检查（镜检）可以迅速了解标本中有无细菌及大致的菌量，而且根据细菌形态、结构和染色性有助于对病原菌的初步识别和分类，为进一步作生化反应、血清学鉴定提供依据；对少数细菌还可根据形态特征作出初步鉴定，对临床（早期诊断和治疗疾病）提供初步信息作为参考。; 简介： 显微镜 种类 特点 用途 普通光学显微镜 可见光直射, 千倍 染色细菌形态结构 暗视野显微镜 散射光,暗视野聚光器 活菌螺旋体动力 相差显微镜 相差板变光相与振幅 活菌形态内部结构 荧光显微镜 高压汞灯紫外光紫蓝光 抗原抗体助诊断 荧光素标记细菌病毒 电子显微镜 电子流,强磁透镜 表面与 超微结构 透射、扫描，数十万~一百万 ; 普通光学显微镜的分辨率为0.25um。一般细菌都大于0.25um，故可用普通光学显微镜观察。;透射电镜; 电子显微镜与光学显微镜的基本区别 光学显微镜 电子显微镜 分辨本领 200nm / 100nm 接近0.1nm 光源（波长） 可见光400~700nm 电子束0.01~0.9nm 紫外光200nm 透 镜 玻璃透镜 电磁透镜 真 空 不要求 1.33×10-5~1.33 ×10-3Pa 成像原理 利用样品对光的吸收 利用样品对电子的散射 形成明暗反差和颜色变化 和透射形成明暗反差 ;一．不染色标本检查法 观察活菌的形态及运动情况； 常用压滴法或悬滴法、毛细管法（厌氧菌） 二．染色标本检查法 （一）常用染料 碱性、酸性、复合染料 （二）常用染色方法 1.单染色法:观察细菌的形态、大小、排列及某些特殊成分。 2.复染色法(鉴别染色法):观察细菌的大小、形态、排列、特殊结构及染色性。; 不染色标本检查法: 观察细菌的大小、形态、动力(主要) 压滴法 悬滴法 染色标本检查法: 毛细管法 单染色法——观察细菌的形态、大小 、排列 革兰氏染色法 复染色法(鉴别染色法) 抗酸染色法 观察细菌的大小、形态、排列、 特殊结构染色法 特殊结构及染色性 荧光染色法 ;常用复染色法;革兰染色法： 结晶紫 碘液 95%乙醇 复红 抗酸染色： 石炭酸复红 3%盐酸酒精 碱性美兰 其它特殊染色; 革兰氏染色法 [原理]等电点学说、化学学说、细胞壁结构学说 （1）细胞壁成分和结构的不同：G+菌肽聚糖多、 G-菌肽聚糖少，但脂类含量高 （2）等电点的不同: G+菌pI 2~3、G-菌pI 4~5 （3）G+含核糖核酸镁盐 [基本程序] 1.? 制片: 涂片（干燥） → 固定 2. 染色: 1min 1min 半min 1min 结晶紫染液-- 卢戈氏碘液-- 95％酒精-- 稀释石炭酸复红染液--吸干后镜检 (初染) 水洗 (媒染) 水洗 (脱色)水洗 (复染) 水洗 ?;革（格）兰染色法;[革兰染色注意事项] 1、涂片取菌（标本）过程严格无菌操作；涂片