小细胞肺癌和低分化鳞状细胞癌中Smac、Survivin与PCNA蛋白表达和预后探究.docVIP

小细胞肺癌和低分化鳞状细胞癌中Smac、Survivin与PCNA蛋白表达和预后探究 　　[摘要] 目的 探讨小细胞肺癌（SCLC）和低分化鳞状细胞癌（PDSCC）的分子学差异，为临床准确诊断提供依据。 方法 经病理确诊为SCLC患者38例，PDSCC患者46例，均取组织样本制成切片，行免疫组化检验。 结果 SCLC患者Smac蛋白低表达率较高，Survivin蛋白阳性表达率较高，PCNA蛋白Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ级表达率较低，与PDSCC患者比较差异有统计学意义（P 0.05），2年生存率PDSCC患者明显低于SCLC患者（P 0.05）。 结论 Smac蛋白低表达、Survivin蛋白阳性可作为SCLC和PDSCC检验和区分的指标之一，而PCNA蛋白分级是否具有明确的指导意义仍需进一步的相关研究来认证。 [关键词] 肺小细胞癌；低分化鳞状细胞癌；蛋白表达；预后 [中图分类号] R734.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）05（a）-0028-03 小细胞肺癌（SCLC）属于肺癌的一种尚未分化分型的类型，据统计其发生率在肺癌患者中占20%～25%，其恶性程度较高，癌细胞生长和发展速度较快，更易较早的引起淋巴转移，在各类肺癌的治疗中，SCLC的预后相对较差，严重影响患者的生命安全[1-2]。肺鳞状细胞癌主要来源于支气管上皮细胞，属于恶性上皮性肿瘤，低分化鳞状细胞癌（PDSCC）在肺鳞状细胞癌中分化程度低，多以中央型出现，显微镜主要表现出与小细胞癌类似的特征[3-4]。因此，临床诊断过程中易将SCLC与PDSCC混淆，造成误诊，严重影响治疗和患者预后，延误治疗时机。本研究选取SCLC和PDSCC患者作为研究对象，旨在探讨两种病症的分子学差异，为临床准确诊断提高依据，现报道如下： 1 资料与方法 1.1 一般资料 病例资料选取2008年1月～2010年1月收治和确诊的肺癌患者，患者均由3名以上临床医生会诊以及石蜡病理切片检验得出结论。包括SCLC患者38例，诊断标准参照免疫组化指标Syn、ChrA、CK和CD56，其中男32 例，女6例，年龄45～72岁，平均（55.0±5.4）岁；PDSCC患者46例，诊断标准参照WHO的相关病理分级标准判定为Ⅲ级分化，其中男38 例，女8例，年龄48～74岁，平均（56.2±5.0）岁。肺癌患者临床分期参照国际抗癌联盟（UICC）的TNM分期标准，两组患者分期情况详见表1。两组患者的年龄、性别及临床分期情况比较差异无统计学意义（P 0.05），具有可比性。 1.2 方法 两组患者均临床取病理组织样本，并分别以常规石蜡包埋制作成病理切片共6份，厚度为4 μm，两组均取切片行免疫组化检验。具体方法：石蜡样本热抗原修复后以磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗，并以H2O2孵育抑制内源性过氧化物酶的活性。切片加入山羊血清封闭处理，除血清部分，分别滴入鼠抗人Smac、Survivin、PCNA单克隆体，孵育后以PBS冲洗，再加入链霉卵白素工作液后PBS冲洗，滴入新鲜DAB溶液行显色反应，并于镜下观察染色适中后用苏木素复染，行常规脱水、封片、观察、记录。 1.3 应用试剂 鼠抗人单克隆体采用美国Cruz公司生产的Smac、北京中山生物技术有限公司生产的Survivin和PCNA。 1.4 观察指标 所有患者均随访2～4年，分别记录两组患者蛋白表达情况，并记录患者2年预后情况。 1.5 诊断标准 Smac以细胞质液呈现棕黄色或棕褐色颗粒状物质且背景清晰为阳性，并利用5个不同的高倍视野观察计数，每个视野计数500个细胞，阳性细胞数≤10%计为（-），细胞含量在11%～25%计为（+），含量在26%～50%计为（++），≥51%计为（+++），认为（-）（+）（++）为Smac蛋白低表达，（+++）为Smac高表达[5-7]。Survivin以细胞质液呈现棕黄色或棕褐色颗粒状物质且背景清晰为阳性，计算阳性细胞在切片中的百分比，以0%计为0分，1%～25%计为1分，26%～50%计为2分，≥51%计为3分；取染色强度中无色计0分，淡黄色计1分，棕黄色计2分，棕褐色计3分，将两项计分相加，总分为0计为（-），1～2分计（+），3～4分计（++），5～6分计（+++），认为≤2分为阴性，2分为阳性[8-9]。PCNA同样以细胞质液呈现棕黄色或棕褐色颗粒状物质且背景清晰为阳性，取高倍视野5次观察切片瘤细胞数量，计算阳性细胞数占总细胞数的百分比，≤25%计为Ⅰ级，26%～50%计为Ⅱ级，51%～75%计为Ⅲ级，≥76%计为Ⅳ级[10]。 1.6 统计学方法 获得数据分别录入软件包SPSS 11.0，并建立数据