IBV荧光定量PCR检测方法的建立及对感染鸡体内病毒的检测.pdfVIP

2014年第 12期 于长泳：IBV荧光定量PCR检测方法的建立及对感染鸡体内病毒的检测 1 IBV荧光定量PCR检测方法的建立及 对感染鸡体内病毒的检测 于长泳 （辽宁省动物疫病预防控制中心，辽宁 沈阳 110164） 摘 要：IBV（infectious bronchitis virus）属于冠状病毒γ群，可以引起鸡的呼吸道疾病，造成严重的损失，现在对 IBV诊断方法的研究进行得十分广泛，建立了多种方法。本研究建立了IBV的Real-Time PCR检测方法，最低检测 灵敏度为10copies/μL，可以有效地区别其他禽源病毒，板内差异为0.1%～0.7%，板间差异为0.7%～1.6%，证明该方 法具有较高的灵敏性、特异性和稳定性，并对分离到的野毒株ck/HHLJ/HH13进行了病毒感染试验的检测，在鸡体内 的气管肺脏肾脏中都具有较高的浓度，其中气管和肾脏中病毒的滴度一直维持很高的水平，至感染后21 d才逐渐消 失，病理组织学可见肾脏和气管病变最严重，证实了所分离到的野毒株ck/HHLJ/HH13是具有很强毒力的肾型IBV 毒株。 关键词：IBV；Real-Time PCR；感染；病毒分布 中图分类号：S852.31 文献标识码：B 文章编号：1672-9692(2014)12-0001-06 DetectionmethodestablishmentforIBVbyfluorescencequantitativePCRandthe detectionofIBVininfectedchickens YuChangyong 110164) Abstract: IBV belongs to theγcorona virus minimum detection sensitivity10copies/μ was viruses; the difference of0.1%the～0.7%sameand0.7%～plate1.6 was - tion experiment about13the ck/HHLJ/HH about ck/HHLJ/HH13 21 13isolated strainwasastrongvirulence nephridium IBV strain. Keywords: 鸡传染性支气管炎（Infectious bronchitis， tis virus，IBV）引起鸡的一种急性、高度接触传染 IB）是由传染性支气管炎病毒（Infectious- bronchi性、病毒性呼吸道疾病。IBV损害肾脏和生殖系统， 收稿日期：2014-10-28 作者简介：于长泳（1978-），男，大学本科，高级兽医师，主要从事动物疫病防控、实验室检测、动物临床等方面工作。 22 现 代 畜 牧 兽 医 2014年第 12期 引起雏鸡死亡、蛋鸡产蛋量和蛋品质下降，对养禽 16.5μL；反应条件：95℃预变性5min；变性： [1] 业造成很大的损失 ，由于IBV经常和其他病毒和细 94℃ 30s；退火：55℃ 30s；延伸：72℃ 菌同时发生，常引起混合感染和继发感染。 30s，30个循环，最后再72℃延伸10min。RT- IBV属于冠状病毒科（Coronaviridae）冠状病毒 PCR产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定，回收目的DNA片 属（Coronavirus）γ冠状病毒群，为外被囊膜