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茶叶中咖啡碱含量的测定 ─紫外分光光度法 制作人：汪小钢 实验目的 咖啡碱是茶汤中苦味的重要物质基础，它具有兴奋神经中枢和利尿等药理功能，对茶叶品质有非常重要的影响。因此，测定其含量是化学评价茶叶品质的需要。 老人、儿童以及一些不适应咖啡碱人群需要饮用低（或无）咖啡碱茶叶及其制品，对它们进行咖啡碱含量测定也是必需的。 茶叶深加工和综合利用的需要。 实验原理 咖啡碱易溶于水，在274nm左右有强烈的吸收。由于茶叶中儿茶素、没食子酸等多酚类物质在同一波长范围内也有很强的吸收，因此需要用碱式醋酸铅等先除去茶汤中多酚等干扰物质，然后再用紫外可见分光光度计在274nm测定咖啡碱的吸光度值，根据咖啡碱的标准曲线求得茶汤中咖啡碱的浓度，以此计算茶叶或相关制品中咖啡碱的含量。 试剂 碱式乙酸铅溶液：称取碱式醋酸铅50 克 溶于100 毫升水中，静置过夜，倾出上清液过滤备用。 0.01M盐酸溶液：取盐酸0.9 毫升，加水稀释至1升 ，摇匀。 4.5M硫酸溶液：取硫酸250毫升 ，用水稀释至1 升 ，摇匀。 咖啡碱标准溶液：称取咖啡碱（纯度不低于99%）100 毫克，溶于1000 毫升水中，此溶液咖啡碱浓度为 100 ug/ml。 主要仪器 紫外分光光度计 分析天平。 测定方法（I）─标准曲线的制作 分别吸取0、1、2、5、10、12 ml 咖啡碱标准溶液于一组100 ml 容量瓶中，各加入0.01M盐酸4.0 ml，加水定容，混匀。 用10 mm 石英比色皿，于波长274 nm 处，以试剂空白溶液作参比，测定吸光度。 以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，并求出回归方程。 测定方法（II） 茶汤制备：称取磨碎茶样3 g 于500 ml 锥形瓶内，加沸水450 ml，于沸水浴中加热45 min，每隔10 min摇瓶一次。抽滤，并用热水洗涤2～3次，滤液移入500 ml容量瓶中，冷却后加水定容。 测定：准确吸取茶汤25 ml 于250 ml 容量瓶中，加0.01M盐酸溶液10 ml、碱式醋酸铅2 ml，加水定容，混匀，静置过滤。吸取滤液50 ml 于100 ml 容量瓶中，加4.5M 硫酸溶液0.2 ml，加水定容，摇匀，过滤。用 10 mm 比色皿，于波长274 nm 处，以试剂空白溶液作参比，测定吸光度。将所测吸光度值代入回归方程计算出茶汤中咖啡碱的浓度。 结果计算 测试效果 此方法是我国现行标准方法，其测定值由于茶叶中其它嘌呤类化合物茶叶碱、可可碱等的影响而略偏高，但重现性好，建议每个样品做三个平行。 * * *