棉花EPSPS基因一个可变剪接体的克隆及功能分析.pdfVIP

棉 花 学 报 Cotton Science 20 16袁28 渊1冤院18―26 棉花 基因一个可变剪接体的克隆及功能分析 1 1* 1 1 2 3 元勇 倪万潮 郭书巧 束红梅 帕尔哈提窑买买提 何林池 1. 苏省农业科学院经济作物研究所/ 农业部长江下游棉花和油菜重点实验室袁 苏南京2100 14曰 2. 国家棉花工程技术研究中心, 新疆乌鲁木齐830091 曰3. 江苏沿江地区农业科学研究所袁 苏如皋226541冤 摘要院可变剪接是生物体基因在转录过程中存在的普遍现象袁该现象是导致蛋白质功能多样性的重要原因之 一袁 但是在棉花中关于功能基因可变剪接事件的报到相对较少遥 本 在克隆棉花 (5-enolpyruvylshiki- mate 3-phosphate synthase)基因的过程中袁发现了该基因的一条可变剪接序列遥 运用生物信息学的方法研究发 现袁该序列比正常的 基因的cDNA 序列少 152 bp 袁这造成了终止密码子在该序列的提前出现曰正常的 基因内含子的剪切都遵循常见的野GT-AG冶剪切规律袁而该可变剪接序列最后一个内含子的剪切是按照 野AT-AC冶规则进行曰该可变剪接序列预测的三维结构模型同正常的 基因的三维结构存在显著差异遥 将 该可变剪接序列插入到原核表达载体pET32a 袁随后将构建好的原核表达重组载体转化入大肠杆菌菌株BL21 (DE3) aroA 袁 通过在M9 基本培养基中的生长研究发现该可变剪接序列不具备正常 基因所具有的功 能遥 本研究结果丰富了棉花 基因转录本存在的形式袁为深入研究棉花 基因的转录机制打下了 基础遥 关键词院可变剪接曰棉花曰 基因曰原核表达 中图分类号院S562.01 文献标志码院A 文章编号院1002-7807(2016)01-0018-09 10.11963/issn.1002-7807.201601003 1 1* 1 1 2 3 Gong Yuanyong , Ni Wanchao , Guo Shuqiao , Shu Hongmei , Paerhatio Maimaiti , He Linchi (1. 210014, ; 2. 830091, China; 3. 22654 1, ) Alternative splicing is a universal phenomenon in gene transcription to increase protein functional diversity, but it has not been widely reported in functional cotton genes. While cloning the cotton 5-enolpyruvylshikimate 3-phosphate synthase gene ( ), we found an alternative splicing variant. Bioinformatic techniques analyses showed th