茄子SmMsrA基因VIGS表达载体的构建及表达分析.pdfVIP

园艺学报，2015 ，42 (8) ：1495 –1504. Acta Horticulturae Sinica doi ：10.16420/j.issn.0513-353x.2015-0177；http ：//www. ahs. ac. cn 1495 茄子 SmMsrA 基因 VIGS 表达载体的构建及表 达分析 * 赵 祯，刘富中 ，张 映，齐东霞，陈钰辉，连 勇 （中国农业科学院蔬菜花卉研究所，北京 100081 ） 摘 要：利用 RT-PCR 从茄子单性结实品系 D-10 中获得甲硫氨酸亚砜还原酶 A 基因（SmMsrA ）的 编码区。通过 Gateway 同源重组技术，构建了 3 个分别含 SmMsrA 基因不同片段的烟草脆裂病毒 （Tobacco rattle virus ，TRV ）介导的基因沉默（VIGS ）表达载体 pTRV2-SmMsrAi 。表达载体转入农杆菌 GV3101 后，用注射压迫法侵染茄子叶片。采用表型观察、TRV 病毒分子检测和 qRT-PCR 技术，评价构建的 VIGS 体系对 SmMsrA 基因的沉默效果。结果表明，报告基因 PDS 沉默后叶片呈现明显的光漂白现象，SmMsrA 基因沉默后叶片呈花叶状，果实变小，叶片和果实中的 SmMsrA 基因的表达量明显降低，表明 SmMsrA 基 因是正向调控茄子果实发育的相关基因。 关键词：茄子；SmMsrA 基因；VIGS ；Gateway 技术；果实发育 中图分类号：S 641.1 文献标志码：A 文章编号：0513-353X （2015 ）08-01495-10 VIGS Expression Vector Construction and Expression Analyses of SmMsrA Gene in Eggplant * ZHAO Zhen ，LIU Fu-zhong ，ZHANG Ying ，QI Dong-xia，CHEN Yu-hui，and LIAN Yong （Institute of Vegetables and Flowers ，Chinese Academy of Agricultural Sciences ，Beijing 100081，China ） Abstract ：The coding sequence of methionine sulfoxide reductase A （SmMsrA ）was amplified from eggplant （Solanum melongena L. ）parthenocarpic line D-10 using reverse transcription polymerase chain reaction （RT-PCR ）method. Through the Gateway recombination technology ，three TRV （Tobacco rattle virus ）-mediated VIGS expression vectors were constructed ，pTRV2-SmMsrAi ，containing different fragments of SmMsrA gene. The VIGS expression vectors were transformed into Agrobacterium strain GV3101，and then inoculated eggplant leaves by Agro-syringe. Phenotypes observation，TRV molecular detection and qRT-PCR thechnology were used to observe and evaluate the VIGS system for silencing the SmMsrA gene effection. The results showed that the positive control of silencing rep